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辅酶Ⅱ(NADP+/NADPH)含量测试盒/比色法
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详细内容
货号:XYP9092928
辅酶Ⅱ(NADP+/NADPH)含量测试盒说明书
一、测定原理:
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NADP+和 NADPH。NADPH 通过 PMS 的递氢作用,使氧化型噻唑蓝
(MTT)还原为甲瓒,570nm 下检测吸光值,从而测定 NADPH 含量。利用 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原 NADP+
为 NADPH,从而检测 NADP+含量。
二、仪器设备(自备):
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
三、试剂组成:(50T/24 样)
酸性提取液:50ml×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:50ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 15 ml×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,-20 ℃保存,用时加入 4ml 蒸馏水,混匀;用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 4ml 蒸馏水,混匀;用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 4ml 蒸馏水,混匀;用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂五:液体 1.8ml×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 30ml×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:液体 50ml×1 瓶,4 ℃保存。
四、操作步骤:
(一)NADP+和 NADPH 的提取:
详见试剂盒内说明书关于样本处理的说明。测定组织、细菌和细胞时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量
测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
(二)测定步骤:(在 1.5ml 棕色 EP 管中按下表依次加样,反应过程需要避光):
充分混匀,静置
5min后,20000g,25℃
离心 5min,弃上清,
沉淀中加入:
混匀,波长 570nm,
光径 1cm,双蒸水调
零测定对照吸光值A1
和测定管吸光
值 A2,计算△A=A2-A1。
注:对照管试剂五加完后必须马上加入试剂六,而测定管加完试剂五之后必须反应
20min 后再加试剂六。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:辅酶Ⅱ(NADP+/NADPH),辅酶Ⅱ(NADP+/NADPH)含量测试盒,比色法
















