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1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)测试盒
价格：￥ 5700
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:31:17
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1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)测试盒说明书
一、测定原理：
在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与 1 分子的 CO2 结合，产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸(PGA)，PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶Ⅰ(NADH)氧化。因此，340nm 吸光度的变化可计算还原型辅酶Ⅰ氧化速率，还原型辅酶Ⅰ氧化速率可反映 Rubisco 的活性。
二、自备的仪器和用品：
可见-紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
三、试剂的组成和配制：
提取液一：液体 25ml×1 瓶，4℃保存；
提取液二：液体 25ml×1 瓶，4℃保存；
试剂一：30ml×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存，临用前加入 12.5ml 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存，临用前加入 12.5ml 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存，临用前加入 1.25ml 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
四、样本的前处理：
粗酶液提取详见试剂盒内说明书。测定组织、细菌和细胞时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。
五、测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定：
（1） 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三 1:1 混合，用多少配多少；在 1ml 石英比色皿中，加入 50ul样本、50ul 试剂四和 900ul 工作液，立即混匀，记录△340nm 处 20s 时吸光值 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2，计算 A=A1-A2。
六、Rubisco 活性计算：
1、按照样本蛋白浓度计算
单位定义：25℃中 1mg 蛋白 1min 氧化 1nmolNADH 为一个酶活力单位。
Rubisco（nmol/min/mg prot）=[△A×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样×Cpr）÷T=643×△A÷Cpr
此法需要测定粗酶液中蛋白质浓度，建议选购本公司生产的 BCA 法蛋白浓度测定试剂盒。
2、按样本鲜重计算
单位定义：25℃中 1g 组织 1min 氧化 1nmolNADH 为一个酶活力单位。
Rubisco（nmol/min/g 鲜重）=[△A×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×W÷T=643×△A÷W
V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L； ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径1cm； V 样：加入样本体积，0.05mL； V 样总：加入提取液体积 1mL；T：反应时间，5min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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