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己糖激酶(HK)测试盒/紫外法
价格：￥ 1500
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
货号：XYG9020
己糖激酶（HK）测试盒说明书
注 意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
HK(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的 个关键酶,催化葡萄糖转化为 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
测定原理：
HK 催化葡萄糖合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH,NADPH 在 340nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 30mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 30mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:液体 5 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 250µL 试剂一和 250µL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂一、二、三、四和五 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟。
3、 加样表:
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,立即混匀,加样本的同时开始计时,在 340 nm 波长下记录 20秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。
注意事项:
1、为了减小操作误差,建议将试剂一、二、三、四、五按比例配成混合液,预热 10min,取 30µL 样本+8µL试剂六+1mL 混合液,混匀后按照上述步骤检测。
2、不同匀浆组织中 HK 活力不一样,做正式试验之前请做 1-2 只预试,若 ΔA>0.5,则说明组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液(计算公式中乘以相应稀释倍数),或缩短反应时间至 2min,使ΔA<0.5,以提高检测灵敏度。
HK 活性计算:
1、血清(浆)HK 活性
单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1113×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 HK 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1113×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=1113×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=2.226×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1.038×10-3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.03 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：己糖激酶(HK),己糖激酶(HK)测试盒,紫外法
