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单宁酶(TAN)测试盒/分光光度法
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详细内容
货号:XYO9066
单宁酶(TAN)测试盒说明书
注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键,生成没食子酸和葡萄糖。
测定原理:
使用抗氧化剂没食子酸丙酯(PG)作为单宁酶酶促反应的底物,在 270nn 下测定底物 PG 反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。
自备实验用品及仪器:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;临用前每支加入 3mL 试剂一,充分溶解后备用;用不完的试剂 4℃保存;
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 270 nm,蒸馏水调零。
2、加样表

混匀,270nm 处读取各管吸光值。计算ΔA=A 对照-A 测定。每个测定管需设个一个对照管。
注意:
可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。
TAN 活力单位的计算:
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0058x + 0.0044,R2 = 0.9994;x 为 PG 含量(µmol/L),y 为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义:40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位。
TAN 活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T=34.48×( ΔA-0.0044)
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义:40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN 活性((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T=34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义:40℃下每克样品每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN 活性(µmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T=34.48×(ΔA-0.0044)÷W
V 反总:反应体系总体积,1mL; V 样:加入样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:单宁酶(TAN),单宁酶(TAN)测试盒,分光光度法
















