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酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒/分光光度法
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详细内容
货号:XYP9076385
酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒说明书
注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
TAL 广泛存在于植物和微生物中,是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL 能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)直接将酪氨酸转化为香豆酸,香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。
测定原理:
TAL 能够分解酪氨酸产生香豆酸,使反应溶液 333nm 下的吸光度随反应时间而上升,根据吸光度的变化率可计算出 TAL 活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液
体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞
(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰
上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取
液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)果汁等液体样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 333nm,蒸馏水调零。
2、试剂二的配置:临用前在试剂二瓶中加入 15mL 试剂一充分溶解待用(用不完的试剂 4℃ 保存一周,
注意: 现配现用),在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。3、在 EP 管中依次加
入如下试剂混匀,10000g4℃离心 5min,取 0.8~1mL 上清至 1mL 石英比色皿,333nm 下测定吸光值 A测定与 A 对照,ΔA=A 测定-A 对照
TAL 活性计算:
1、血清(浆)或果汁 TAL 活性
单位的定义:每分钟每 mL 血清(浆)或果汁在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.01 为一个
酶活力单位。
TAL(U/mL)=ΔA×V 反总÷( V 样÷V 样总)÷0.01÷T =17.5×ΔA 2、组织、细菌或细胞 TAL 活性(1)
按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
TAL(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.01÷T =17.5×ΔA÷Cpr 此法需要自行测定样本蛋白质
浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
TAL(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =17.5×ΔA÷W (3)按细菌或细胞密度计
算:
单位定义:每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力
单位。
TAL(U/104 cell)=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =0.035×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1.05mL;V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:
反应时间,60 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:酪氨酸解氨酶(TAL),酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒,分光光度法
















