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总抗氧化能力(T-AOC)测试盒/微量法
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详细内容
货号:XYP9076332
总抗氧化能力(T-AOC)测试盒说明书
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
研究意义:
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理:
在酸性环境下,还原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。
自备实验用品:
恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,使用前预冷。
试剂一:液体 15mL×1 瓶,避光保存。
试剂二:液体 1.5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 1.5mL×1 瓶,避光保存。
混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合,使用前 37℃预温。
样品的制备:
(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过30 d)后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
操作步骤:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 593nm,蒸馏水调零。
2、操作表

注意:空白管只需测定一次。
总抗氧化能力计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.8442x-0.0048,R2=0.9979
(1)按样本质量计算
单位定义:
每 g 样本每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/g 鲜重)=(△ A+0.0048)÷ 0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T=59.228×(△ A+0.0048)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 蛋白每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/mg prot)=(△ A+0.0048)÷0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T=59.228×(△ A+0.0048)÷Cpr
(3)按细胞计算
单位定义:每万个细胞每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/104 cell)=(△ A+0.0048)÷0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量
(万个))÷T= 59.228×(△ A+0.0048)÷ 细胞数量(万个)
(4)按液体体积计算
单位定义:每毫升样本每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/mL)=(△ A+0.0048)÷0.8442×1000÷T= 59.228×(△ A+0.0048)
V 样总:加入提取液体积,1 mL;V 样:反应中样品体积,6µL;T:反应时间,20min;
W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.4221x - 0.0048;R2=0.9979
(1)按样本质量计算
单位定义:每 g 样本每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/g 鲜重)=(△ A+0.0048)÷0.4221×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=118.455×(△ A+0.0048)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 蛋白每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/mg prot)=(△ A+0.0048)÷0.4221×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T
=118.455×(△ A+0.0048)÷Cpr
(3) 按细胞计算
单位定义:每万个细胞每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/104 cell)=(△ A+0.0048)÷0.4221×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量
(万个))÷T= 118.455×(△ A+0.0048)÷ 细胞数量(万个)
(3)按液体体积计算
单位定义:每毫升样本每分钟产生 1µmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/mL)=(△ A+0.0048)÷0.4221×1000÷T= 118.455×(△ A+0.0048)
V 样总:加入提取液体积,1 mL;V 样:反应中样品体积,6µL;T:反应时间,20min;
W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL
注意事项:
1. 试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴乳胶手套操作。
2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:总抗氧化能力(T-AOC),总抗氧化能力(T-AOC)测试盒,微量法
















