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亚硝酸还原酶(NiR)测试盒/微量法
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详细内容
货号: XYN9005
亚硝酸还原酶(NiR)测试盒说明书
注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为 NO 或 NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理:
亚硝酸还原酶可将 NO2-还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2-减少,即 540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品:
天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 112mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 5mL 蒸馏水溶解。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
工作液:临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
测定操作表:

计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.3594x + 0.0072,R2 = 0.9997;x 为标准品浓度(µmol/mL),y 为吸光值(A 标准管-A 空白管)。
1.按照蛋白含量计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每小时还原 1µmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(µmol/h /mg prot)= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷(V 样×Cpr)÷T = 1.47×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每小时还原 1µmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(µmol/h/g 鲜重)=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷(W ×V 样÷V 样总)÷T =1.47×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义:每 104个细胞每小时还原 1µmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(µmol/h /104 cell)= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷1.3594×V 标÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 1.47×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷细胞数量
V 标:标准液体积,0.04mL;V 样:体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1h; Cpr:样本蛋白含量;W:样本质量,g
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.6797x + 0.0072,R2 = 0.9997;x 为标准品浓度(µmol/mL),y 为吸光值(A 标准管-A 空白管)。
1.按照蛋白含量计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每小时还原 1µmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(µmol/h /mg prot)= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷(V 样×Cpr)÷T = 2.94×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每小时还原 1µmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(µmol/h/g 鲜重)=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷(W ×V 样÷V 样总)÷T =2.94×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义:每 104个细胞每小时还原 1µmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(µmol/h /104 cell)= [A 空白管-(A 测定管-A 对照管)-0.0072]÷0.6797×V 标÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 2.94×(A 空白管-A 测定管+A 对照管-0.0072)÷ 细胞数量
V 标:标准液体积,0.04mL;V 样:体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1h; Cpr:样本蛋白含量;W:样本质量,g
注意事项:
1. 配制好的工作液 3 天内使用完。
2. 若吸光值超过 1.5,将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 严格控制显色时间,否则会对结果有影响。
4. 标准曲线线性范围为 0.03µmol/mL-1.5µmol/mL。
5. A 空白管-(A 测定管-A 对照管)线性范围为 0.02-1.5。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:亚硝酸还原酶(NiR),亚硝酸还原酶(NiR)测试盒,微量法
















