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抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒/微量法
价格：￥ 965
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
货号：XYV9009
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒说明书
注 意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化 H2O2 氧化 AsA,是植物 AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到 AsA 的含量,APX 与 AsA 具有一定的负相关性。
测定原理:
APX 催化催化 H2O2氧化 AsA,通过测定 AsA 氧化速率,来计算得 APX 活性。
自备仪器用品:
低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 3 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体 3mL×1 支,4℃保存。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 290nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂一在 25℃中预热 30min。
3.依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20µL 上清液、140µL 预热的试剂一 20µL 试剂二和 20µL 试剂三,迅速混匀后在 290nm 测定 10s 和 130s 光吸收 A1 和 A2,△A=A1-A2。
APX 活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T=1786×△A÷ Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:每 g 组织每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX(nmol/min/g 鲜重 ) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1786×△A ÷W
ε:AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),200µL=2×10-4 L;109:1mol=1×109nmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),20µL=0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;T:催化反应时间(min),2min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T=3571×△A÷ Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:每 g 组织每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX(nmol/min/g 鲜重) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T=3571×△A ÷W
ε:AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×103 L/mol/cm;d:96 孔板光径(cm),0.5 cm;V 反总:反应体系总体积(L),200µL=2×10-4 L;109:1mol=1×109nmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),20µL=0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;T:催化反应时间(min),2min。
注意事项:
配制好的试剂二 4℃保存,并且 3 天内使用完。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：抗坏血酸过氧化物酶(APX),抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒,微量法
