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羧酸酯酶(CarE)测试盒/微量法
价格：￥ 378
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
货号： XYE9007
羧酸酯酶（CarE）测试盒说明书
注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
哺乳动物 CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨酸水解酶家族。CarE 催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE 参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解 毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制 CarE活性。
测定原理:
CarE 能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固蓝显色;在 450 nm 光吸收增加速率,计算 CarE 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 15mL×2 瓶, 4℃保存;
试剂三:粉剂×2 支, 4℃保存,临用前取 1 支试剂三,加 0.6ml 无水乙醇充分溶解;
试剂四:粉剂×2 支,-20℃保存,临用前取 1 支试剂四,加少量试剂二溶解;
工作液配制:临用前配制,向 1 瓶试剂二中,加入溶解后的试剂三和试剂四各 1 支,充分溶解,过滤,4℃避光保存,可用 1 周。
粗酶液提取:
细菌、细胞样品制备
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 200 万细菌或细胞加入 400µL 试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000g 4℃离心 30min,取上清液待测。
2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆;12000g 4℃离心 30min,取上清液待测。
3、液体:直接测定
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 450 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,依次加入 5µL 蒸馏水和 200µL 试剂二,迅速混匀,于 450nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 空白管=A2-A1
4. 测定管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,依次加入 5µL 上清液和 200µL 试剂二,迅速混匀,于 450nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A3,第 190s 吸光值记为 A4。△A 测定管=A4-A3
注意:空白管只需测定一次。
CarE 活性计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1 组织中 CarE 活性
(1) 按蛋白浓度计算
CarE 活性单位定义:每 mg 组织蛋白在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
= 13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
CarE 活性单位定义:每 g 组织在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷W÷T
=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
2 细菌或细胞中 CarE 活性
CarE 活性单位定义:每 1 万个细菌或细胞在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为一个 CarE 活性单位。
CarE 酶活(U/104 cell)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷细胞密度(104 cell/mL)÷T=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞密度(104 cell/mL)
3. 液体中 CarE 活性
CarE 活性单位定义:每毫升样品在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/mL )= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷V 样÷T
=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)
V 反总:反应体系总体积,205µL=2.05×10-4L;V 样总:上清液总体积,1 mL;V 样:加入上清液体积(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g);T:反应时间(min),3min。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
1 组织中 CarE 活性
(3) 按蛋白浓度计算
CarE 活性单位定义:每 mg 组织蛋白在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
= 13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(4) 按样本鲜重计算
CarE 活性单位定义:每 g 组织在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷W÷T
=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
2 细菌或细胞中 CarE 活性
CarE 活性单位定义:每 1 万个细菌或细胞在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为一个 CarE 活性单位。
CarE 酶活(U/104 cell)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷细胞密度(104 cell/mL)÷T=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞密度(104 cell/mL)
3. 液体中 CarE 活性
CarE 活性单位定义:每毫升样品在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/mL )= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷V 样÷T
=13.67×(△A 测定管-△A 空白管)
V 反总:反应体系总体积,205µL=2.05×10-4L;V 样总:上清液总体积,1 mL;V 样:加入上清液体积(mL),0.005 mL;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g);T:反应时间(min),3min。
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热门标签：羧酸酯酶(CarE),羧酸酯酶(CarE)测试盒,微量法
