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脯氨酸脱氢酶(ProDH)测试盒/分光光度法
价格：￥ 620
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
货号：XYA9002
脯氨酸脱氢酶（ProDH）测试盒说明书
注 意 ：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ProDH 是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布最广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸,降低 ProDH 活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。
测定原理:
利用异硫氰酸甲酯检测 ProDH 催化的脱氢反应,600nm 处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 2 mL×1 支, 4℃保存;
试剂二:液体 50 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 8mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存;
试剂四:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 8mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存;
试剂五:粉剂×5 支,4℃保存;
粗酶液提取:
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆，1500g 4℃离心 15min，取上清液于一支新的 EP 管中，加入一滴试剂一（用 10µL 的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置 30min 后，16000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 600nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)混合液的配制:首先将试剂三和试剂四配成溶液(见试剂的组成和配制),临用前根据用量按照试剂二(V):试剂三(V):试剂四(V)=7.2(mL):0.9(mL):0.9(mL)的比例充分混匀。(注意:现配现用,用多少配多少),置于 30℃水浴 5min;
(2)试剂五的配制:取试剂五一支,临用前加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用,现配现用。
(3)1mL 玻璃比色皿中加入 175µL 样本、75µL 试剂五和 750µL 混合液,混匀,立即记录 600nm 处初始吸光值 A1 和 10min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
ProDH 活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
ProDH(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
ProDH(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，1mL； V 样：加入样本体积，0.175mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：脯氨酸脱氢酶,脯氨酸脱氢酶(ProDH)测试盒,分光光度法
