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谷氨酰胺酶(GLS)测试盒/分光光度法
价格：￥ 367
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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货号：XYN9010
谷氨酰胺酶（GLS)测试盒说明书
注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GLS(EC 3.5.1.1)是酰胺基水解酶,催化天冬酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调 节 游离 氨含 量和尿 素 代 谢。
测定原理:
GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，4 ℃避光保存；临用前每瓶加入 12.5mL 蒸馏水充分溶解待用，现配现用；
试剂三：液体 30 mL×1 瓶，常温保存；
试剂四：液体 10 mL×1 瓶，常温保存；
试剂五：液体 6 mL×1 瓶，常温保存；
试剂六：液体6 mL×1瓶，常温避光保存。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
8000g4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 420nm,蒸馏水调零。
2、样品测定(在 EP 中加入下列试剂):
注意:
1、试剂六如出现沉淀,静置后取上清使用。
2、ΔA(A 测定管-A 对照管)若出现负值,可能是酶活性较低,可将反应时间 1h 延长到 2h,相应的在计算公式中除以 2。
酶活性计算:
标准条件下测定的回归方程为 y =3.8488x +0.0057,R2 = 0.9983;;x 为标准品浓度(µmol/mL),y 为吸光值A。
1、血清(浆)GLS 活性
单位定义:每 mL 血清(浆)每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS(nmol /min/mL)= (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反总÷V 样÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)
2、组织、细菌或细胞 GLS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每 mg 蛋白质每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS(nmol /min /mg prot)= (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每 g 组织每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS(nmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反总÷(500× V 样÷V 样总)÷T×1000=0.3637×(ΔA-0.0057)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，60min；V 反总：反应体系总体积，1.05mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万; 1000，µmol 到 nmol 换算系数。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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