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一氧化氮NO含量测试盒/微量法
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详细内容
货号:XYP9076493
一氧化氮NO含量测试盒说明书
注 意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
NO(Nitric Oxide,NO)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理:
NO 在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2—,在酸性条件下,NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在 550nm 处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算 NO 含量。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。(用之前 60℃加热震荡 15min)
样品处理:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后10000g,4℃,离心 15min,取上清置于冰上待测。
3. 体液和培养液等其它液态样品:直接测定。
测定步骤和操作表:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 550nm。
2、 操作表

NO 含量计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为:y= 0.016x -0.0103,R2= 0. 9986
1、组织样品:
(1)按样本质量计算
NO 含量(µmoL/g 鲜重)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3
= 0.125×(ΔA +0.0103)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
NO 含量(µmoL/mg prot)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3
= 0.125×(ΔA +0.0103)÷Cpr
2、细胞:
NO 含量(µmol/104 cell)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)×10-3
= 0.125×(ΔA +0.0103)÷细胞数量(万个)
3、其他样品:
NO 含量(µmoL/L)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V 反总÷V 样
= 125×(ΔA +0.0103)
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为:y= 0.008x - 0.0103,R2= 0. 9986
1、组织样品:
(1)按样本重量计算
NO 含量(µmoL/g 鲜重)=(ΔA +0.0103)÷0.008×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3
= 0.25×(ΔA +0.0103)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
NO 含量(µmoL/mg prot)=(ΔA +0.0103)÷0.008×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3
= 0.25×(ΔA +0.0103)÷ Cpr
2、细胞:
NO 含量(µmol/104 cell)=(ΔA +0.0103)÷0.008×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)×10-3
= 0.25×(ΔA +0.0103)÷细胞数量(万个)
3、 其他样品:
NO 含量(µmoL/L)=(ΔA +0.0103)÷0.008× V 反总÷V 样= 250×(ΔA +0.0103)
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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