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乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒/分光光度法
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详细内容
货号:XYE9002
乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒说明书
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AchE 属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。
测定原理:
AchE 催化 Ach 水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸(TNB);TNB 在 412nm 处有吸收峰,通过测定 412 nm 吸光度增加速率,计算 AchE活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 2.6mL 试剂一,充分震荡溶解。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 2.6mL 试剂一,充分震荡溶解。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。3. 血清等液体:直接测定。
3. 血清等液体:直接测定。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。
3. 取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 100µL 上清液、800 µL 试剂一、50µL 试剂二和 50 µL 试剂三,迅速混匀,于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 测定管=A2-A1。
注意:空白管只需测定一次。
AchE 活性计算公式:


ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103L/mol/cm;V 反总:反应体系总体积(L),1 mL=0.001 L;106:1mol=1×106µmol;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);W:样本质量,g;V 样:加入上清液体积(mL),0.1 mL;T:反应时间(min),3 min。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:乙酰胆碱酯酶(AchE),乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒,分光光度法
















