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碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒/分光光度法
价格：￥ 184
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
货号： XYE9006
碱性磷酸酶（AKP/ALP）测试盒说明书
注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理:
在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安替比林和铁反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算 AKP 活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1 支（EP 管中），2 µ mol/mL 酚标准液，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。
2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定步骤：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 37℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管：取 EP 管，加入 20µL 蒸馏水，200µL 试剂二，200µL 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温15min；加入试剂四 600µL，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4. 标准管：取 EP 管，加入 20µL 标准品，200µL 试剂二，200µL 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温15min；加入试剂四 600µL，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5.对照管：取 EP 管，加入 20µL 上清液，200µL 蒸馏水，200µL 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温15min；加入试剂四 600µL，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
6. 测定管：取 EP 管，加入 20µL 上清液，200µL 试剂二，200µL 试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温15min；加入试剂四 600µL，混匀后于 510 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。每个测定管设一个对照管。
AKP/ALP 活性计算：
1. 血液中 AKP/ALP 活力计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1µmol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP 活力(µmol/min /mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷V 样÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
2. 组织、细菌或细胞中 AKP/ALP 活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 µ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP(µmol/min/mg prot)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(Cpr×V样)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 µ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP(µmol/min/g 鲜重)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(W×V 样÷V样总)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每 104 个细菌或细胞每分钟催化产生 1 µ mol 酚定义为 1 个酶活单位。AKP/ALP(µmol/min/104 cell)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T= 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量
C 标准品：2µmol/mL；V 反总：反应体系总体积（mL），1020µL=1.02 mL； V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间（min），15 min。
注意事项：
1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。
2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。
3.加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不完全。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：碱性磷酸酶(AKP/ALP),碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒,分光光度法
