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羟甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGCS)测试盒/微量法
价格：￥ 7175
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
货号： XYT9031
羟甲基戊二酰辅酶A合成酶（HMGCS）测试盒说明书
注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
羟甲基戊二酰辅酶 A 合成酶是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶,催化乙酰 CoA 与乙酰乙酰 CoA 生成羟甲基戊二酰 CoA。
测定原理:
HMGCS 催化乙酰 CoA 与乙酰乙酰 CoA 生成羟甲基戊二酰 CoA,同时产生 CoASH,使 DTNB 转化为黄色的TNB,在 412nm 下有特征吸光值。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:6mL×1 瓶,4℃避光保存。
样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 25µL 试剂一、25µL 试剂二和 50µL 试剂三，混匀，加入 100µL 样本上清，迅速混匀后记录 412nm下初始吸光值 A1 和 4min 后的吸光值 A2。计算 ΔA＝A2-A1。
HMGCS 活性计算:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)活性
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样 ÷T=36.76×ΔA
2、组织、细菌或细胞 HMGCS 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=36.76×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /104 cel)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.074×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×104L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)活性
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样 ÷T=73.53×ΔA
2、组织、细菌或细胞 HMGCS 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=73.53×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=73.53×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /104 cel)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.147×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×104L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
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