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谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒/微量法

价格：￥ 367

品牌名称：$brandModel.Title型号：原产地：中国大陆更新时间：2026/10/19 10:49:03

产品摘要：谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒 GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

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详细内容

货号：XYN9019

谷氨酰胺合成酶（GS)测试盒说明书

注意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

测定原理:

GS 在 ATP 和 Mg²⁺存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为 γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在 540nm 处有吸收峰,可用分光光度计测定。

所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：10mL×1 瓶，-20℃保存；临用前 37℃预热 20min，充分混匀，如有沉淀，静置 10min，取上清待用。

试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；临用前 37℃预热 20min，充分混匀，如有沉淀，静置 10min，取上清待用。

试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入 5mL 蒸馏水充分溶解待用。

试剂四：15mL×1 瓶，4℃保存。

样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。

2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、在 EP 管中加入下列试剂:

混匀，25℃室温静置 10min 后，8000g，25℃离心 10min，取 200µL 上清液至微量石英比色皿或 96 孔板中，测定 540nm 处的吸光值 A。△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

GS 活力单位的计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.8348x + 0.0008,R² = 0.9999
1、血清(浆)GS 活性
单位定义:每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式:
2023090809175550315

2、组织、细菌或细胞 GS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
2023090809182444676
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
2023090809183861932
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
2023090809190645157

V 反总：反应体系总体积，0.3mL； V 样：加入样本体积，0.07mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.4174x + 0.0008,R² = 0.9999
1、血清(浆)GS 活性
单位定义:每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式:
2023090809195395663
2、组织、细菌或细胞 GS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
2023090809201942589
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
2023090809202965452
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每小时产生 1µmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
2023090809204489535