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线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒/分光光度法
价格：￥ 2575
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
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线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒说明书
注 意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CA 是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成，其含量是三羧
酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量，其中（1）丙酮
酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性
和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰 CoA 情况，（3）乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶
活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理：
CA 在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出 CA 的含量。
自备仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：
酸性提取液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
碱性提取液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 7.5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 7.5mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；
标准品：液体 1mL×1 支，10µmol/mL 柠檬酸标准液，4℃保存。
线粒体中柠檬酸提取：
称 0.05~0.1g 样品（建议称 0.1g 样本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心 5min；
取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300µL 该上清液和 300µL 碱性提取液中
和后可用于细胞质 CA 含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液，充分悬浮溶解，超声
波破碎（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此溶液 300µL 和 300µL 碱性提取液中和，
混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 330nm，蒸馏水调零。
2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。
3、样本测定：
柠檬酸含量计算：
（1）按蛋白浓度计算
柠檬酸含量(µmol/mg prot)=[C 标准管×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管) ×V 样]÷（V 样÷Cpr）=10×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管)÷Cpr
蛋白质含量需要另外测定。
（2）按样本鲜重计算
柠檬酸含量(µ mol/g 鲜重)=[C 标准管×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管) ×V 样]÷（W×V样÷V 样总）=10×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管)÷W
C 标准管：标准液浓度，10µmol/mL； V 样：加入反应体系中样本体积：0.3mL；V 样总：加入提取液体积：1mL；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意：最低检测限为 10nmol/mg prot 或 1µmol/g 鲜重。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：线粒体柠檬酸(MCA),线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒,分光光度法
