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α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测试盒/分光光度法
价格：￥ 528
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测试盒说明书
注 意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
α-KGDH（EC 1.2.4.2）广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中，是三羧酸循环调控关键酶之一，催化 α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶 A。
测定原理：
α-KGDH 催化 α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶 A 生成琥珀酰辅酶 A、 二氧化碳和 NADH，NADH 在 340 nm有特征吸收峰，以 NADH 的生成速率表示 α-KGDH 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：1mL×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体 55.5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂七：粉剂×1 支，4℃保存;
试剂八：粉剂×1 支，4℃保存;
试剂九：粉剂×1 支，-20℃保存;
试剂十：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 2.1mL 蒸馏水充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
工作液的配制：临用前把试剂五、试剂六、试剂七、试剂八和试剂九转移到试剂四中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细菌或细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 α-KGDH（此步可选做）。
5、 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于线粒体 α-KGDH 活性测定。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm 处，蒸馏水调零。
2、工作液于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 5min。
3、在 1mL 石英比色皿中依次加入 40µL 试剂十、60µL 样本和 1.1mL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s的吸光值 A1 和 2min20s 时的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
α-KGDH 活性计算：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
α-KGDH 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
α-KGDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=325×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
α-KGDH 活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.65×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1.2×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.06 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH,α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)测试盒,分光光度法
