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丙酮酸激酶(PK)测试盒/分光光度法
价格：￥ 217
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
货号：XYP9076600
丙酮酸激酶(PK)测试盒说明书
注 意 ：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生 ATP 的关键酶之一，因此测定 PK 活性具有重要意义。
测定原理：
PK 催化磷酸烯醇式丙酮酸和 ADP 生成 ATP 和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化 NADH 和丙酮酸生成乳酸和 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 PK 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存;
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；；
试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 25µL×2 支，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）试剂二的配制：临用前取试剂二一瓶，加入 22.5mL 试剂一和 2.65mL 蒸馏水充分溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用。
（2）试剂三的配制：临用前取试剂三一支，加入 1.5mL 蒸馏水充分溶解待用；现配现用。
（3）在 1mL 石英比色皿中加入 50µL 样本、50µL 试剂三和 900µL 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。
PK 活性计算：
1、血清（浆）中 PK 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷V 样÷T=2613×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 PK 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(V 样×Cpr) ÷T=2613×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=2613×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=5.226×ΔA
V 反总：反应体系总体积，9.75×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.03 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：丙酮酸激酶(PK),丙酮酸激酶(PK)测试盒,分光光度法
