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己糖激酶(HK)测试盒/微量法
价格：￥ 827
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
货号：XYG9019
己糖激酶（HK）测试盒说明书
注 意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
HK(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的 个关键酶,催化葡萄糖转化为 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
测定原理：
HK 催化葡萄糖合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH,NADPH 在 340nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存;
样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)在试剂二中加入 18mL 试剂一充分溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2)在试剂三中加入 1mL 试剂一,充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10µL 样本、10µL 试剂三和 180µL 试剂二,混匀,立即记录340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
注意:不同匀浆组织中 HK 活力不一样,做正式试验之前请做 1-2 只预试,若 ΔA>0.5,则说明组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液(计算公式中乘以相应稀释倍数),或缩短反应时间至 2min,使 ΔA<0.5,以提高检测灵敏度。
HK 活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)HK 活性
单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=643×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 HK 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)HK 活性
单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1286×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 HK 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=1286×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=2.572×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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热门标签：己糖激酶(HK),己糖激酶(HK)测试盒,微量法
