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ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒/分光光度法
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详细内容
货号:XYP9076672
ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒说明书
注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸与 ATP 反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理:
AGP 催化的逆向反应生成 G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH,340nm 下测定 NADPH 增加速率,即可计算 AGP 活性。
需自备的的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 18mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 10mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
粗酶液制备:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、试剂一置 30℃保温 10min 以上。
3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂


AGP 活性计算:
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(W× V 样÷V 样总)÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷WV 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.4;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:ADPG焦磷酸化酶(AGP),ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒,分光光度法
















