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蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)测试盒/微量法
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详细内容
货号: XYS9021
蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)测试盒说明书
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向 SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。
测定原理
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰
试剂的组成和配制
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二: 液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×2 支,-20℃保存;临用前每支加入 1.2mL 试剂二充分溶解待用,现配现用;
试剂四:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。
样品测定的准备:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在 EP 管中依次加入下列试剂):

SS-Ⅰ活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0012x - 0.0492;x 为标准品浓度(µg/mL),y 为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1µg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(µg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反总]÷(V 样×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1µg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(µg /min/g 鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V 反总:反应体系总体积,0.05mL; V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0006x - 0.0492;x 为标准品浓度(µg/mL),y 为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1µg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(µg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V 反总]÷(V 样×Cpr) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1µg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(µg /min/g 鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W
V 反总:反应体系总体积,0.05mL; V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:蔗糖合成酶(分解方向,SS-Ⅰ),蔗糖合成酶(分解方向,SS-Ⅰ)测试盒,微量法
















