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中性转化酶(NI)测试盒/微量法
价格：￥ 850
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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中性转化酶（NI）测试盒说明书
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物 Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。
NI 主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
测定原理：
NI 催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm 有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算 NI 活性
自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存;
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存;
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 10mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤和加样表：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200µL 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 510nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
NI 活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001；x 为标准品浓度（µg/mL），y 为吸光值。
（1）按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1µg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性（µg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鲜重计算：
单位的定义：37℃每 g 组织每分钟产生 1µg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性（µg/min /g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0008x -0.001；x 为标准品浓度（µg/mL），y 为吸光值。
（1）按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1µg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性（µg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鲜重计算：
单位的定义：37℃每 g 组织每分钟产生 1µg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性（µg/min /g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001)÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
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