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纤维素含量(CLL)测试盒/微量法
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详细内容
货号:XYG9095
纤维素含量(CLL)测试盒说明书
正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起,是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维,是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。
测定原理:
纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔酶标板、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 100mL× 1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 6mL× 1 支,4℃保存。
样品的前处理:
1、样品 80℃烘干至恒重【注 1】,粉碎,过 40 目筛。称取 0.01g 样本,加入 1mL 80%乙醇,90℃水浴 20min【注 2】,冷却至室温,8000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀中加入 1.5mL80%乙醇和丙酮各清洗一遍(涡旋振荡 2min 左右,8000g 25℃离心 10min,弃上清),沉淀烘干后即为粗细胞壁。
2、在上述粗细胞壁中加入 1mL 试剂一,充分混匀,90℃水浴 30min【注 2】。取出冷却后 8000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀中加入 1mL 蒸馏水混匀,涡旋振荡 2min 左右,8000g 25℃离心 10min,弃上清,沉淀用蒸馏水重复清洗 3 次(加入 1mL 蒸馏水混匀,涡旋振荡 2min左右,8000g 25℃离心 10min,弃上清)。沉淀中加入 1mL 丙酮,混匀后 8000g 25℃离心 10min,弃上清,沉淀烘干待用。
3.在上述烘干的沉淀中加入 0.5mL 蒸馏水,置于冰水浴中,缓慢加入 0.75mL 浓硫酸,混匀,冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min,取上清液,用蒸馏水稀释 20 倍后待测【注 3】。
注意事项:
【注 1】 80℃烘干的时间为 2 小时,依据样本情况可延长烘干时间。
【注 2】 90℃加热过程中 EP 管可能爆开,建议用胶带封口或使用带螺旋盖的防爆 EP 管。
【注 3】 部分样本中纤维素含量较低(淀粉含量较高),如米粉、板栗、甘薯等,可不稀释或减小稀释倍数。
测定步骤:
1、 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm。
2、 调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制:在试剂二中加入 4mL 试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用不完的试剂 4℃保存一周;
4、加样表(在 EP 管中反应):

混匀,置 95 度水浴中 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温后,取 200µL 至 96 孔酶标板中,于 620nm 处,分别读取空白管和测定管吸光值,ΔA=A 测定管-A 空白管。
注意:
1、空白管只要做一管。
2、由于浓硫酸具有强腐蚀性,请谨慎操作。
纤维素含量计算:
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 5.25x - 0.0043;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、按样本质量计算:
纤维素(mg /g 干重)= [(ΔA+0.0043) ÷5.25×V1]÷(W×V1÷V2)×20
=4.76×(ΔA+0.0043)÷W
V1:加入样本体积,0.15mL;V2:加入提取液体积,1.25mL;W:样本干重;W:样本干重, 0.01g;20:样本稀释倍数。
注意:最低检测限为 1mg/g 干重或 10µg/ mg prot
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:纤维素含量(CLL),纤维素含量(CLL)测试盒,微量法
















