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双链DNA(ds-DNA)浓度测定试剂盒(荧光法)
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详细内容
双链DNA(ds-DNA)浓度测定试剂盒(荧光法)
dsDNA HS A ssay Kit
产品及特点:
dsDNA HS Assay Kit 是一种简便、灵敏、精确的双链 DNA(dsDNA)荧光定量检测试
剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、缓冲液及相关的 dsDNA 标准品。本试剂盒对 dsDNA
具有高度选择性,在 0.2~100ng 区间具有很好的线性关系,是一种快速、简单、灵敏的
DNA 定量方法。
本试剂盒操作简单方便,使用前先将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液,然后加入
待测 dsDNA 样品,即可使用荧光酶标仪或 Qubit®荧光仪进行读数。本试剂盒对一些常规
的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。
产品货号:XY9732851
产品规格:200 assays/1040元
成分规格:
保存条件
2-8℃避光保存,保存有效期为 6 个月,请注意避免反复冻融。
使用方法
1. 使用荧光酶标仪进行双链 DNA 定量检测分析
注意:①为简便起见,以下操作说明中以 10 µl 的 dsDNA 样品为例,但是实际应用中应根据
dsDNA 样品的浓度选择合适的体积(一般情况下待测的 dsDNA 样品体积范围为 1~50 µl),然后调
整检测工作液的体积,使整个检测体系的总量为 200 µl。 ②如待测样品浓度高于 100 ng/ µl,请进
一步稀释样品后再进行检测,否则会影响结果的准确性。
1.1 在使用前,将试剂盒中的各组份放至室温。检查组份 A 是否有沉淀。若有沉淀
物,可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育,并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解。
1.2 制备检测工作液。取试剂盒中的组份 A,按照 1:200 的比例用组份 B 进行稀
释,配制成检测工作液,现配现用。(如待测 DNA 样品共 8 个,且每个样品设置一
个复孔,需取 20 µl 的组份 A 加入到 4 ml 的组份 B 中并混合均匀,制成检测工作
液,备用。)
注意:每次配制检测工作液时要使用洁净的离心管。
1.3 向 96 孔酶标板中加入新鲜配制的检测工作液,每孔 190 µl。核酸定量检测试剂
盒使用说明书
(注意:推荐使用黑色的酶标板,如 Greiner 或 Corning 公司的黑色 96 孔酶标板,可有效降低反应
孔之间的荧光干扰。)
1.4 取试剂盒中的组份 D,按浓度梯度进行稀释,制成一系列稀释的 dsDNA 标准
品。(也可使用已知浓度的 DNA 样品)
(注意:因须绘制标准曲线,dsDNA 标准品进行浓度梯度稀释时须至少设置 5 个梯度,且待测
dsDNA 样品的浓度须介于稀释标准品的浓度区间范围内,以保证检测结果的准确性。)
1.5 向 96 孔酶标板中加入梯度浓度的 dsDNA 标准品或待测的 dsDNA 样品,每孔
10µl,并分别设置 1-2 个复孔,加入后用移液枪轻轻地吹打混匀。
1.6 将酶标板至于室温环境下避光孵育 2 分钟。
1.7 使用荧光酶标仪检测荧光信号值,选择合适的检测波段:激发波长(Ex)设置为
485nm,发射波长(Em)设置为 530nm。
1.8 测得的梯度浓度 dsDNA 标准品的荧光信号值分别对应其浓度,绘制标准曲线;
将测得的未知浓度 dsDNA 样品的荧光信号值代入标准曲线中,可计算出 dsDNA 样
品的浓度。
2. 使用 Qubit®荧光仪进行 dsDNA 定量检测分析
注意:①为简便起见,以下操作说明中以 10 µl 的 dsDNA 样品为例,但是实际应用中应根据 dsDNA
样品的浓度选择合适的体积(一般情况下待测的 dsDNA 样品体积范围为 1~50 µl),然后调整检测工
作液的体积,使整个检测体系的总量为 200 µl。②如待测样品浓度高于 100 ng/µl,请进一步稀释样
品后再进行检测,否则会影响结果的准确性。
2.1 在使用前,将试剂盒中的各组份放至室温。检查组份 A 是否有沉淀。若有沉淀
物,可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育,并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解。
2.2 制备检测工作液。取试剂盒中的组份 A,按照 1:200 的比例用组份 B 进行稀释,
配制成检测工作液,现配现用。(如待测 DNA 样品共 8 个,且每个样品设置一个复
孔,需取 20 µl 的组份 A 加入到 4 ml 的组份 B 中并混合均匀,制成检测工作液,备
用。)
2.3 向分析管中分别加入新鲜配制的检测工作液,每管 190 µl。
(注意:仅可使用 0.5 ml PCR 的薄壁分析管。)
2.4 向分析管中加入组分 C、组分 D、或待测的 dsDNA 样本,每管 10 µl,涡旋震荡
2-3 秒使充分混匀。请注意正确标记 dsDNA 标准品和待测样品的分析管。
2.5 将分析管至于室温环境下避光孵育 2 分钟。
2.6 按照 Qubit®荧光仪的操作说明,选择 dsDNA High Sensitivity 检测程序测定荧光
信号值。
注意事项
●荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
●为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
●对于检测试剂和 DNA 标准品,每次使用前要先摇匀再离心数秒钟,使液体充 分沉降到管底。
●为保证定量结果的精确,请使用校准后的移液器操作。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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