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一步法RT-PCR扩增试剂盒(去除基因组)
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详细内容
一步法RT-PCR扩增试剂盒(去除基因组)
O n e S t e p R T - P C R K i t ( w i t h g D N a s e )
产品及特点:
本试剂盒是专为一步法 RT-PCR 实验研制,去除基因组 DNA、逆转录和 PCR 在同一 反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,在避免污染的同时提高了检 测灵敏度和实验效率。本试剂盒包括极其灵敏的去除基因组 DNA 的酶,可在瞬间清 除残留的基因组,还有高效逆转录酶、快速热启动 DNA 聚合酶,同时包含适用于逆 转录和 PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的其它组分。SuperRT 逆转录酶 RNase H 活性缺失,减少了逆转录反应中 RNA 的降解。该逆转酶逆转录效率高,可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。PCR 反应使用的快速热启动 DNA 聚合酶具有扩增效率高、 特异性强、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功 效。使用本试剂盒扩增得到的目的产物 3′端附有一个″A″碱基,可直接用于 T/A 克隆。
产品货号:XY920402
产品规格:50次×20ul/1450元、100次×20ul/2430元
成分规格:
保存条件
长期保存,请置于-20℃,有效期 24 个月。使用后请及时放入-20℃保存以保证酶的活性。
使用方法
1. 将 RNA 模板、引物、2×OneStep RT-PCR Mix(with gDNase)和 RNase-Free Water 溶解并置于冰上备用。
2. 按下表加入试剂,至终体积 20 µl:


(注意:引物浓度请以终浓度 0.1-1.0 µM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引
物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。)
3. 涡旋震荡混匀,短暂离心,将溶液收集到管底。
4. 设置反应程序,将 PCR 管置于热循环仪中,进行 RT-PCR 反应。
反应条件:
(注意:a.一般 PCR 实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,退火时间一般为 20-30 秒,
无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化
反应条件。b.延伸时间根据扩增的片段大小设定,本产品中包含的 DNA Polymerase 扩增效率为 1
kb/30s。c.可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少,扩增量不足;循环次数多,错
配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。)
5. 反应结束后取 5 µl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。
注意事项
●在操作过程中应避免 RNase 污染,防止 RNA 降解或实验中的交叉污染,建议在专门的 区域进行 RNA 操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更 换手套。
●实验尽量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,应使用 0.1%DEPC(焦碳酸二乙 酯)水溶液在 37℃处理 12 小时,并在 120℃下高压灭菌 30 分钟后使用,或者将玻璃 器皿在 180℃下干热灭菌 60 分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用 0.1%的 DEPC 处 理后进行高压灭菌。
●本试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。使用后应 尽快放回-20℃,避免反复冻融。
●本试剂盒必须使用特异性引物,引物的选择可根据具体实验来选择,引物设计的好坏 直接影响到 RT-PCR 反应的结果,设计引物时需考虑 GC 含量,引物长度,引物位 置,PCR 产物的二级结构等因素,建议采用专业的引物设计软件来设计。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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