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细胞Ca2+钙离子检测试剂盒
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详细内容
细胞Ca2+钙离子检测试剂盒
产品货号:XY9-481151
产品规格及价格:50T/1400元;100T/2100元
产品简介:
钙离子检测试剂盒采用Fura-2/AM细胞内钙离子浓度荧光探针检测钙离子浓度水平的变化。
钙离子浓度变化是活细胞接受外界刺激后产生级联反应的重要信息传递方式,因此细胞内钙离子检测是信号转导G蛋白偶联受体(GPCR)介导的相关药物筛选以及其他相关实验中非常重要的一种研究手段。
Fura-2钙离子探针经过特殊设计,疏水性很强,消除了电荷,容易通过细胞膜,具有极高的细胞渗透性,经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的Fura-2新产物,从而被滞留在细胞内。细胞内的Fura-2钙离子探针能以1:1的比例特异性地与Ca2+结合,并且结合Ca2+后荧光特性有改变,这种变化可指示Ca2+的存在及其浓度。
Fura-2游离配体荧光较低,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是,当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光,荧光会增加,避免了自发荧光的干扰,因而可以直接在单波长激发光下检测其荧光强度即可反映[Ca2+]i的变化。
游离Fura探针的最大激发波长为 380 nm,最大发射波长为 510 nm。与钙离子结合后最大激发波长为 340 nm,最大发射波长为 510 nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度的变化。
Fura-2荧光探针仪器的适用范围更广,具有很强的探针吸收性能,使得更低浓度的探针即可成功检测Ca2+变化,检测敏感度更高。Fura-2与Ca2+ 亲和力低,易解离,适合测定细胞内Ca2+ 的快速、微量变化。
可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
1.荧光分光光度计
2.荧光酶标仪
3.流式细胞仪
4.荧光显微镜
5.激光共聚焦

使用方法:
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.钙离子染色液为 DMSO 溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.探针为了便于观察防止误操作导致损失,在试剂盒中时是采用透明管包装,收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4.荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
6.染色后立即进行分析。
7.Fura-2 探针容易受潮,稳定性较差,注意干燥保存。从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后再开封。
8.Fura-2 探针母液时要用干燥的新吸头,不能使用含水的吸头。
9.未使用完的 FURA-2 探针母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。母液遇水极易分解,如果长期不用,建议根据每次使用量分装保存,用封口膜封口,并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。
10 Fura-2 探针工作液含水,配制后不可以长期保存,须现配现用
11.Fura-2 融解后离心至管底部再打开螺旋盖,防止开盖时损失。
12.可以在染色工作溶液中加入 20% Pluronic F127 溶液(可选步骤),Pluronic F127 可以帮助 BcellProbe® Fura-2 更快进入细胞,不建议在 Pluronic F127 中长期保存 Fura-2 溶液。
13.必须使用荧光检测专用的黑色 96 孔板。
14.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。
1. 染色工作液的配制:
用 HBSS 稀释 Fura-2 溶液 500 倍-1000 倍,配制成 Fura-2 染色工作液。
2. 收集培养好的待测细胞样本,用 HBSS 洗涤细胞 3 次。
3. 离心去上清后,将 Fura-2 染色工作液加入细胞,在 37℃孵育 30 -60 分钟。
4. 用 HBSS 洗涤细胞 2-3 次。
5. 用 200 µl 或 500 µl HBSS 重悬细胞。在 37℃下再继续孵育 20-40 分钟。
6. 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 340 nm,发射波长 510 nm。得到荧光值 F。
7. 在细胞重悬液中加入 10%体积的(20 µl 或 50 µl)通透剂,充分混匀,在 37℃避光孵育 10 分钟。
测定荧光值 F1。
8. 在以上细胞重悬液中加入 10%体积的(20 µl 或 50 µl)淬灭剂,充分混匀,在 37℃避光孵育 10 分钟。测定荧光值 F0。
【注】:
以上 F、F1、F0 测定时必须使用同一台仪器。
9. 根据以下公式计算钙离子浓度:
钙离子浓度 = 224 nM *(F-F0)/(F1-F)
常见问题分析:
1.如何采用双波长比率定量?
如有需要,也可以采用双波长比率定量,分别测定 340 nm 和 380 nm 的各荧光值,按下列公
司进行计算。
Ca2+浓度计算:
[Ca2+]i = Kd ×(R-Rmin)/(Rmax-R)× β
其中:
Kd 为 224 nM
R 为 340 nm / 380 nm 的荧光强度比值(F340 nm / F380 nm)
R0 为加入淬灭剂后的 340 nm / 380 nm 的荧光强度比值(F0340 nm / F0380 nm)
R1 为加入通透剂后的 340 nm / 380 nm 的荧光强度比值(F1340 nm / F1380 nm)
β 为加入淬灭剂后和加入通透剂后 380 nm 的荧光强度比值(F0380 nm / F1380 nm)
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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