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黏着斑蛋白（vinculin）荧光染色试剂盒-绿色荧光
价格：￥ 50T/2100元；100T/4000元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:46:28
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详细内容
黏着斑蛋白（vinculin）荧光染色试剂盒-绿色荧光
产品货号：XY9-44169
产品规格及价格：50T/2100元；100T/4000元
产品简介：
黏着斑染色试剂盒采用特异性单抗配合荧光二抗标记通用的黏着斑标记物Vinculin。采用TRITC标记的鬼笔环肽（Phalloidin）标记骨架蛋白F-actin，肌动蛋白细胞骨架和粘着斑染色试剂盒是一种非常敏感的免疫细胞化学工具，其中包含荧光标记的鬼笔环肽（TRITC偶联的鬼笔环肽），绘制肌动蛋白丝的局部取向以及针对Vinculin蛋白的小鼠单克隆抗体，对细胞中黏着斑的染色非常特异。
细胞骨架(cytoskeleton）是真核细胞中由蛋白质聚合而成的三维的纤维状网架体系。细胞骨架包括微丝、微管和中间纤维。细胞骨架在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用。细胞骨架肌动蛋白是球形的、大约42kd的蛋白，在几乎所有的真核细胞都存在。这是一个非常保守的蛋白，在各物种差异不超过20%。肌动蛋白是两种细胞内丝状结构的构成单体：微丝（三种主要的细胞骨架成分之一），以及细肌丝（是肌肉细胞收缩复合物的一部分）。肌动蛋白参与很多重要的细胞功能，包括肌肉收缩，细胞移动，细胞分裂和胞质分裂、小泡和细胞器的运动、细胞信号，以及细胞连接和细胞形态的保持和建立。
粘着斑是膜相关复合物，可作为肌动蛋白丝的成核位点，并作为细胞外部、质膜和肌动蛋白细胞骨架之间的交联剂。粘着斑的功能是结构性的，将外部的ECM与内部的肌动蛋白细胞骨架相连。 它们也是信号转导的位点，响应粘连而启动信号传导途径。粘着斑由附着于细胞外基质的整联蛋白型受体组成，并与含有Vinculin蛋白（通用的粘着斑标记物）、talin, α-actinin, paxillin, tensin, zyxin and focal adhesion kinase (FAK)的蛋白复合物在细胞内相关。
鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片，细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
用荧光标记的鬼笔环肽染色可以清晰地显示细胞中微丝的分布。将鬼笔环肽注射到细胞中同样能阻止细胞运动，可见微丝的功能依赖于肌动蛋白的组装和去组装的动态平衡。鬼笔环肽这种性质使得它们成为一种探索F-Actin分布的的良好工具，可以通过用带有各种荧光探针的鬼笔环肽结合Actin丝状物在荧光显微镜下观察来实现。鬼笔环肽的荧光衍生物已经被证明在活体或固定细胞内定位Actin丝状物和在体外观察actin丝状物的实验中起重要作用。
TRITC-Phalloidin染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。 TRITC-Phalloidin可以广泛用于固定、通透性细胞，但也可以进入活细胞中。
产品应用：
1.激光共聚焦
2.荧光显微镜
使用方法：
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.标本应新鲜，且未受其他化学物品污染。应根据组织、细胞类型不同调整通透时间。
3.动物细胞样本细胞通透剂处理的时间很关键，如果处理时间太短，会造成很深的背景颜色，干扰细胞骨架的观察；如果处理时间太长，会破坏骨架蛋白使骨架纤维断裂，造成细胞空洞。通透时间应控制在10-35分钟。需要根据预实验的染色结果确定最佳通透时间。一般预实验起始通透时间植物样本为10分钟，动物细胞样本5分钟。
4. 染色液染色时间根据根据预实验结果可以进行调整，颜色过浅可延长染色时间，颜色过深可缩短染色时间。
5. 洗片时动作要轻柔，避免将细胞从玻片上洗掉。
6.染色后用水充分洗涤，自然晾干即可，不能用常规的酒精梯度脱水方法。不同样本的操作方法稍有差异，请根据具体样本操作。
7.下面以细胞爬片/涂片样本的染色为例，滴加相应的试剂到玻片上，加样量以覆盖样本即可。如果是植物切片等，也可以在离心管、试管等里面进行洗涤、通透、染色等操作，置载玻片上观察即可。
1.染色工作液配制：
根据样本数量，用PBS将TRITC-Phalloidin荧光染料10倍稀释。再用相应的无血清培养基或其他缓冲液（如HBSS等）将荧光染料进行10倍稀释，配制成染色工作液。
2.将制作好的细胞爬片/细胞涂片用37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗2次。【注】: 也可以培养板原位检测。
3.细胞固定：滴加溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定15-20分钟，立即用PBS洗涤3-5次。
4. 室温条件下，透化细胞：滴加 0.1% Triton X-100/PBS 溶液透化处理样本，处理 3-5 分钟。
5. 室温条件下，用 PBS 洗细胞 3-5 次，自然晾干。
6. 在室温下用封闭液封闭 30 分钟。
7.将抗体（抗Vinculin）用封闭液稀释至工作浓度，并在室温下孵育1小时。Vinculin抗体推荐稀释度为1:100-1:500。
8. 用洗涤缓冲液洗涤三次（每次 5-10 分钟）。
9. 稀释的 FITC 二抗在室温下孵育 30-60 分钟。
10.室温条件下，染色：用适量细胞骨架染色液工作液，覆盖住玻片上的细胞，室温避光孵育30分钟-更长时间，最长可以过夜染色，一般40分钟-1小时即可。
11. 用洗涤缓冲液洗细胞 3 次，每次 5-10 分钟。自然晾干。
12. （可选步骤）使用 1000 倍稀释的 DAPI 溶液对细胞核进行复染 1-5 分钟。
13.用洗涤缓冲液洗细胞3次，每次5-10分钟
14.用激光共聚焦显微镜观察。TRITC-Phalloidin激发/发射波长540-545/570-595 nm和DAPI激发/发射波长359-364/454-461 nm。
【注】: 或封片后观察。标本玻片可置于4℃避光保存，通常6个月内可继续做染色分析。 加适量PBS覆盖样本。
染色结果：
细胞骨架纤维呈橙红色。粘着斑呈绿色。
细胞核呈蓝色（如果 DAPI 复染）。
细胞核和细胞质表面分布许多排列不规则的纤维束，走向清晰。
【注】: 如果见到部分细胞骨架纤维并非呈纤维状，而是呈串珠状或颗粒状，可以进一步优化通透、染色时间、染液浓度等条件。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：绿色荧光,黏着斑蛋白,黏着斑蛋白（vinculin）荧光染色试剂盒-绿色荧光
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