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外泌体提取试剂盒(Exosomes)(体液)-高纯4ml/T
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详细内容
外泌体提取试剂盒(Exosomes)(体液)-高纯4ml/T
产品货号:XY9-39024
产品规格及价格:20T/1800元;50T/3200元
产品简介:
总外泌体(Exosomes)提取试剂盒(体液用,超纯)适用于从动物体液(如腹水、脑脊液、羊水等)中提取总外泌体。不需要超速离心,仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的外泌体,具有快速简单,提取效率高的特点,可节省更多的实验时间和样本。提取的外泌体可根据实验目的用于后续的多种实验,应用范围广泛。
本试剂盒不适合唾液、乳汁和血浆/血清的外泌体提取,需要用于唾液、乳汁外泌体提取请选用其它产品编号的试剂盒。
外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体 )的膜性小囊泡,直径约为30-150nm,天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各种体液中,研究发现,Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质、mRNA和microRNA,并且exosome能够通过生物屏障,在细胞间传递功能性核酸分子,从而发挥各种生物学功能。
外泌体囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质,参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递,以调节不同范围的生物过程。外泌体囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识,显现了外泌体作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外,未修饰和工程化的外泌体囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。
传统的体液中分离和提取exosome的主要方法是超速离心法,这种方法缺点是耗时耗力,往往需要30⁻⁷0个小时,每次最多只能处理6个样品,需要大量的起始材料,而且产量不高。
自主开发的外泌体快速提取试剂盒系列产品,可以通过简单离心快速高效获得高纯度外泌体颗粒。本试剂盒提取的外泌体完好无缺,能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析、电镜分析、NTA粒径分析等下游实验应用。
本试剂盒按每个样本处理4ml体液计,每个50T试剂盒大约可以用于提取200ml体液。如果需要处理大量的体液,将提取液按体液体积的1:4加入体液即可。
可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
可以提供各种细胞、组织染色,免疫组织化学,细胞培养等相关试剂盒产品。
可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。
可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
产品应用:
根据需要使用
产品特点:
1.使用方便,无需超速离心,省时省力;
2.纯度高,富集量大,应用范围广;
3.获取的 Exosome 结构和功能完整;
4.稳定性好,便于运输,便于保存。

使用方法:
预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。
由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。以下以 4 ml 体液为例,实际操作时按体液和提取液 A 用量体积比 4:1 使用即可。不同体液中所含的外泌体数量差异极大,请根据实际情况选择体液样品的量,根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的体液样本。除非已经确认体液样本中含有较多外泌体或者体液样本较难获得,一般体液样本建议每个样体液用量不少于 8ml。能上样量为 15-20 ml 及以上,条件允许的情况下采用尽可能多的体液样本。
某些特殊体液样本,如果比较粘稠,可以用 PBS 缓冲液或者生理盐水 2 倍稀释后再按照下列步骤提取。
条件允许的情况下可以将体液样本浓缩后再提取外泌体。已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察,只能冰上或 4℃保存,存放时间不超过两天,注意不可冷冻保存,否则可能会影响电镜观察效果。本试剂盒提取得到的外泌体为多个外泌体的聚合物,进行外泌体粒径检测时可能会显示粒径偏大。如果要进行粒径检测或电镜拍照,需要进行充分分散后使用。稀释后用涡旋振荡器充分振荡分散。或者使用其它方法提取的试剂盒。
1. 收集 4 ml 待提取的培养基样品,置 2-8℃保存。
2. 将样品在 4℃条件下,3000×g 离心 15 分钟。弃沉淀,收集上清。
3. 小心将上清移入另一干净离心管中。
4. 将样品在 4℃条件下,10000×g 离心 20 分钟。弃沉淀,收集上清。
5. 小心将上清移入另一干净离心管中。
6. 在 4 ml 上清中加入 1ml 提取液 A,盖紧离心管盖,上下颠倒混匀 1 分钟左右,使液体充分混匀。
7. 置 2-8℃冰箱静置过夜。
8. 在 4℃条件下,10000×g 离心 60 分钟。
9. 小心移除上清,收集沉淀。
10. 取 500 µl 外泌体保存液将沉淀重悬,用移液器轻轻吹打混匀,得到外泌体沉淀重悬液,进行下列外泌体纯化步骤操作。
清洗外泌体纯化离心管:
1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。
2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。 外泌体纯化:
1. 将外泌体纯化离心管内管插入所提供的一个微量离心管中。
2. 向内管中加入过 500 µl 的外泌体沉淀重悬液样本,并盖上盖子。
3. 将盖好盖子的外泌体纯化离心管放入离心转子中,让盖子的连接带朝着转子的中央;用一个类似的离心管平衡。 4. 以 5000-8000 ×g 离心约 10-15 分钟。离心至
大约剩余 50 µl-100 µl 液体。
5. 离心结束后将整个离心管从离心机中取出,取出内管。
6. 为了回收纯化后的外泌体,将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中,让打开的盖子朝着转子的中央;用一个类似的离心管进行平衡。
7. 以 1000 ×g 离心 2 分钟,使纯化后的外泌体样本从纯化内管转移到收集管中。
8. 吸取收集管中的液体,即得到外泌体样品纯品。
9. 用纯水或缓冲液洗涤内管和收集管,继续纯化下一个样品。
如果使用过的离心管需要长期保存,可以按下列方法清洗和保存离心管内管。
外泌体纯化离心管清洗和保存:
1. 使用后用水冲洗干净;
2. 内管加入超纯水 500 µl,5000×g 离心 5 分钟;
3. 吸净内管中的水,加入 500 µl 0.1M NaOH,5000×g 离心 20 分钟;
4. 用 0.1 M NaOH 浸泡 24 小时;
5. 用水冲洗干净;
6. 用无菌水浸泡 2-8℃保存。
7. 外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。
常见问题分析:
1. 如 何 鉴 定 提 取 的 外 泌 体 ?
通常使用透射电镜检测(形态)、粒径检测(大小)、外泌体标志蛋白 Western blot 检测方法鉴定提取的外泌体。
2.外泌体 WB 标志蛋白用 什 么 ?
在进行 WB 检测时,通常检测外泌体标志蛋白为 CD63 、CD9 、CD81 、TSG101 、ALIX、HSP70 等。 3.进行 外 泌 体 WB 鉴 定 时 有 什 么 内 参 蛋 白 可 供 选 择 ?
没 有 , 该 检 测 属 于 定 性 检 测 。
4. 蛋 白 浓 度 低 ?
很多细胞外泌体量不够下游应用,在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。
5.抽提得到的 RNA 浓度低?
很多细胞外泌体量不够下游应用,在条件允许的情况请尽 可 能 加 大 培 养 上 清 的 上 样 量 。
5. 外 泌 体 纯 化 管 内 管 膜 会 因 为 离 心 时 间 过 长 而 变 干 么 ?
不 会 , 因 为 内 管 有 死 体 积 , 总 会 有 溶 液 残 留 在 内 管 中 。 死 体 积 大 约 10-20µl 。
6. 可 以 重 复 使 用 过 滤 管 么 ?
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当,可以反复使用多次。但是超过 8 次重复使用后过滤膜有破损风险,注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
7. 外 泌 体 在 纯 化 时 出 现 了 沉 淀 , 如 何 改 进 ?
如果过滤过快或者过度浓缩都有可能引起沉淀。如果样品的外泌体浓度很高,建议降低最终的外泌体浓度,保留更多的液体。对于因过滤速度敏感而导致的沉淀,建议的改进方法是:
1)离心力降低 30%-50%2)在过滤过程中取出过滤管,用枪头反复吹吸几次。 有时候用外泌体纯化离心管连水都离不下来,可能是什么原因?如果出现这种情况,可能时过滤膜的孔被堵住。请先用 0.1M NaOH 清洗再离心。用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。说明书中推荐在室温下进行离心,考虑到外泌体的稳定性,是否可以在 4℃进行离心?可以,但是低温可能会
增加外泌体样品的粘性,导致流速减慢,建议可将离心时间延长。仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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