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p3×Flag-cmv-24
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详细内容
p3×Flag-cmv-24
中文名称:p3×Flag-cmv-24
产品规格:2ug
产品货号:XY9112VT
运输:常温
保存:-20°C
有效期:两年
货期:一周
其他:多克隆位点经测序验证

基本结构与特点
启动子:含有强人类巨细胞病毒(CMV)启动子调控区,能够在哺乳动物细胞中驱动高水平的组成型表达。在 COS 细胞中可驱动组成型蛋白质表达水平高达 1mg/l,对于表达水平较弱的细胞系,蛋白质表达水平通常也能达到〜0.1mg/l。
标签序列:带有 3×FLAG 标签序列,融合了总共 22 个氨基酸的 3 个串联 FLAG 表位。含有 3×FLAG 的融合蛋白的检测比其他系统灵敏得多,可提高多达 200 倍,且该标签亲水、含有肠激酶切割位点、尺寸相对较小,能最小化蛋白质功能改变、阻断其他表位或降低溶解度的风险。
复制起点:包含 SV40 复制起点,在接纳 SV40 复制的 COS 细胞中可导致高水平的 DNA 复制。
多克隆位点:具有多个限制性酶切位点组成的多克隆位点(MCS),如 Xba I、BamH I 等,便于目的基因的插入和克隆。
应用领域
重组蛋白表达:可用于在哺乳动物细胞中表达带有 3×FLAG 标签的重组蛋白,方便后续通过 anti-FLAG 抗体进行蛋白的检测、纯化以及免疫沉淀等操作,如在构建真核表达重组质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1 和 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18 中,成功在 293-T 细胞中表达了弓形虫表面抗原 1(SAG1)及棒状体蛋白 18(ROP18)。
基因功能研究:将感兴趣的基因克隆到该载体中,转染细胞后表达相应的蛋白,进而研究基因的功能、蛋白的定位、蛋白与蛋白之间的相互作用等。例如构建 p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6 真核表达载体,转染 Hela 细胞后研究 HPV18E6 蛋白的致癌机制。
使用方法
载体构建:通过限制性内切酶酶切和连接反应,将目的基因插入到 p3×Flag-cmv-24 载体的多克隆位点区域,构建成重组表达载体。
细胞转染:将构建好的重组载体采用合适的方法转染到目标哺乳动物细胞中,如脂质体转染法、电穿孔法等。
表达检测:利用 anti-FLAG 抗体,通过 Western blot、免疫细胞化学、免疫沉淀等方法检测目的蛋白的表达情况、定位以及与其他蛋白的相互作用等。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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