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YEplac181载体
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详细内容
YEplac181载体
中文名称:YEplac181载体
产品规格:2ug
产品货号:XY94181VT
质粒图谱

载体类型:酵母质粒,属于大肠杆菌 / 酿酒酵母穿梭载体。
抗性标记:氨苄青霉素(Ampicillin),在含有氨苄青霉素的培养基中可以筛选出含有该载体的大肠杆菌。
筛选标记:LEU2 基因,可用于筛选转化成功的酿酒酵母细胞,只有携带 LEU2 标记的酵母细胞才能在缺乏亮氨酸的培养基上生长。
结构特点
复制起点:具有酵母 2 微米质粒的复制起点(2 micron ori),可在酿酒酵母中进行高拷贝复制,同时也含有大肠杆菌的复制起点 pmb1,能在大肠杆菌中复制。
多克隆位点:包含 pUC19 的多克隆位点(MCS),且 10 个克隆位点都是独特的,便于外源基因的插入,酶切位点包括 HindIII、EcoRI 等。
启动子:含有 lac 启动子,可用于调控外源基因在大肠杆菌中的表达。此外,还有 LEU2 基因的启动子,用于驱动 LEU2 基因在酵母中的表达。
报告基因:LacZ' 基因可用于蓝白斑筛选,便于快速筛选出含有插入片段的重组质粒。
功能与应用
基因表达:可用于在酿酒酵母中表达外源基因,利用酵母细胞的蛋白质合成和加工系统,生产具有生物活性的蛋白质或多肽。
基因克隆:其多克隆位点便于将外源基因克隆到载体上,实现基因的扩增和保存。
遗传转化:作为载体将目的基因导入酿酒酵母细胞,研究基因的功能、调控机制以及酵母细胞的生理过程等。
使用方法
质粒溶解:收到质粒干粉后,加入 20µl 无菌水至管底,溶解质粒,室温静置 1min。
转化感受态细胞:取 200µl 感受态细胞与 5~10µl 质粒 DNA 混匀,冰上放置 30min,然后进行 42℃热激 90s,再冰浴 2min,使质粒进入感受态细胞。
修复培养:每管加入 800µl LB 液体培养基,37℃培养 1h,转速 150r/min,让转化后的细胞恢复生长。
筛选培养:将适量的复苏细胞涂布在含有相应抗性的 LB 平板上,正置平皿 30min 待琼脂面干燥后,倒置培养 12-16h,长出菌落。
质粒提取:挑取单克隆菌落至相应抗性的 LB 液体培养基中,震荡培养 12-16h,根据实验需要提取质粒,用于后续实验。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
热门标签:YEplac181载体,YEplac181,YEplac181质粒















