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YEplac112载体
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详细内容
YEplac112载体
中文名称:YEplac112载体
产品规格:2ug
产品货号:XY94180VT
质粒图谱
载体描述
One of 9 shuttle vectors (ATCC 87585 87593) allowing lacZ detection of cloned inserts and containing the pUC19 MCS with all 10 cloning sites unique. Vectors differ in mode of replication (YE, YC or YItype) and yeast marker (LEU2, URA3 or TRP1). This is a YEtype (yeast episomal) vector with the TRP1 marker. The HindIII, PstI and XbaI restriction sites from the TRP1 gene of S. cerevisiae were removed by using oligodirected mutatgenesis.

载体类型:酵母表达载体,属于大肠杆菌 / 酿酒酵母穿梭载体。
载体大小:4989bp。
抗性标记:氨苄青霉素(Ampicillin),用于在大肠杆菌中筛选含有该载体的菌株。
筛选标记:TRP1 基因,可用于筛选转化成功的酿酒酵母细胞,只有携带 TRP1 标记的酵母细胞才能在缺乏色氨酸的培养基上生长。
结构特点
复制起点:具有酵母 2 微米质粒的复制起点(2 micron ori),可在酿酒酵母中进行高拷贝复制,同时含有大肠杆菌的复制起点,能在大肠杆菌中复制。
多克隆位点:包含 pUC19 的多克隆位点(MCS),且 10 个克隆位点都是独特的,便于外源基因的插入。
启动子:含有 lac 启动子,可用于调控外源基因在大肠杆菌中的表达。
报告基因:LacZ' 基因可用于蓝白斑筛选,便于快速筛选出含有插入片段的重组质粒。
功能与应用
基因表达:可用于在酿酒酵母中表达外源基因,利用酵母细胞的蛋白质合成和加工系统,生产具有生物活性的蛋白质或多肽。
基因克隆:其多克隆位点便于将外源基因克隆到载体上,实现基因的扩增和保存。
遗传转化:作为载体将目的基因导入酿酒酵母细胞,研究基因的功能、调控机制以及酵母细胞的生理过程等。
使用方法
质粒准备:从供应商处获得 YEplac112 载体质粒,或通过实验室保存的菌株进行质粒提取。
目的基因克隆:将目的基因通过酶切、连接等方法插入到 YEplac112 载体的多克隆位点中,构建重组质粒。
转化大肠杆菌:将重组质粒转化到大肠杆菌中,利用大肠杆菌的快速繁殖特性进行质粒的扩增。
筛选阳性克隆:在含有氨苄青霉素的培养基上筛选出含有重组质粒的大肠杆菌克隆,并通过菌落 PCR、酶切鉴定等方法进一步确认阳性克隆。
提取重组质粒:从阳性大肠杆菌克隆中提取重组质粒,用于后续的酵母转化实验。
转化酿酒酵母:采用化学转化法或电转化法等将重组质粒转化到酿酒酵母细胞中。
酵母筛选与鉴定:在缺乏色氨酸的培养基上筛选出转化成功的酿酒酵母细胞,并通过 PCR、测序等方法对重组酵母进行鉴定。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
热门标签:YEplac112载体,YEplac112,YEplac112质粒















