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pCMV-N-Flag
价格：￥ 990
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/22 8:32:06
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详细内容
pCMV-N-Flag
中文名称：pCMV-N-Flag
产品规格：2ug
产品货号：XY9966VT
运输：常温
保存：-20°C
有效期：两年
货期：一周
其他：多克隆位点经测序验证
基本信息
质粒类型：真核表达质粒，主要用于在哺乳动物细胞中表达目的蛋白。
启动子：含有 CMV（巨细胞病毒）启动子，能高效启动目的基因在细胞中的表达。
抗性标记：通常为卡那霉素抗性，在大肠杆菌中进行质粒扩增时，可利用卡那霉素抗性筛选含有该质粒的阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用 G418 筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
拷贝数：一般为高拷贝数质粒，有利于在宿主细胞中大量复制，提高目的蛋白的表达量。
结构特点
Flag 标签序列：在多克隆位点的 5' 端含有一个可以编码 Flag 标签的序列。Flag 标签是一种短肽序列（DYKDDDDK），融合在目的蛋白的 N 端，可方便地使用抗 Flag 的抗体来识别、检测和纯化目的蛋白。
多克隆位点：具有多个限制性内切酶识别位点，便于目的基因的插入，可通过限制性内切酶酶切和连接反应，将目的基因克隆到载体中，实现目的蛋白与 Flag 标签的融合表达。
其他元件：还可能包含一些其他的调控元件，如 SV40 多聚腺苷酸化信号，用于指导 mRNA 转录本 3'- 端的正确加工，增强 mRNA 的稳定性；有的还含有 f1 原点，可用于单链 DNA 的生产等。
应用领域
蛋白质表达与检测：用于在哺乳动物细胞中表达 N 端带有 Flag 标签的目的蛋白，便于通过抗 Flag 抗体进行 Western blot、免疫荧光等实验，检测目的蛋白的表达水平、细胞定位等。
蛋白质纯化：利用 Flag 标签与抗 Flag 抗体或 Flag 亲和树脂的特异性结合，可方便地对表达的融合蛋白进行纯化，获得高纯度的目的蛋白，用于后续的功能研究、结构分析等。
蛋白质相互作用研究：可与其他含有相应标签或结构域的蛋白共同表达，通过免疫共沉淀等实验方法，研究目的蛋白与其他蛋白之间的相互作用关系。
构建稳定细胞株：转染细胞后，使用 G418 等药物进行筛选，可获得稳定表达目的蛋白的细胞株，用于长期的细胞生物学研究，如观察目的蛋白对细胞生长、增殖、凋亡等过程的影响。
使用方法
质粒扩增：将 pCMV-N-Flag 载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，在含有卡那霉素的培养基上培养，筛选出阳性克隆，然后进行大量培养，提取质粒。
质粒转染：采用合适的转染方法，如脂质体转染法、电穿孔法等，将质粒导入哺乳动物细胞中。
表达检测：转染后的细胞经过一段时间培养后，可通过 Western blot 检测目的蛋白的表达情况，利用抗 Flag 抗体识别融合蛋白；也可通过免疫荧光实验，观察目的蛋白在细胞内的定位。
稳定细胞株筛选：转染后的细胞在含有 G418 的培养基中培养，未成功转染或未稳定整合质粒的细胞会逐渐死亡，而稳定表达目的蛋白的细胞则能够存活并形成克隆，可进一步挑选单克隆细胞进行扩大培养，获得稳定细胞株。
注意事项：该产品仅供科研使用，不得用于临床诊断及其他用途，产品说明书以到货说明书为准，网站说明书仅供参考！
热门标签：pCMV-N-Flag,pCMV-N-Flag载体,,,,pCMV-N-Flag质粒
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