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HotStart Bst4.0 LHNB LyoMix(紫绿变色,可冻干)-65℃反应
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详细内容
HotStart Bst4.0 LHNB LyoMix(紫绿变色,可冻干)-65℃反应
描述:该制品是 5x 浓度的全预混可冻干试剂,内含反应 Buffer、
dNTP、Mg
2+、HotStart Bst4.0 聚合酶及稳定剂。是 精心
研制的高性能的 LAMP 扩增用试剂,通用于 DNA 或 RNA 的靶标
检测。在 Bst4.0 快速、高耐受性的基础上,不仅实现稳定、快速、
高灵敏度的扩增性能,在 HotStart 性能的加持下,还实现了假阳性
的大幅下降。
5xLyoMix 不含甘油,在配合 研制的 Q10 球型冻干
赋形剂(货号:S2012)后,可轻松制备含扩增引物的冻干球。这种组
合设计便于研究、开发、生产于一体流程化操作,并兼具一定的灵
活性,减少了试剂开发和固定化生产的难度。制品性能:HotStart
Bst 4.0 包含热启动 Aptamer,该配体确保酶在<30°C 时,酶活封
闭效率>90%,在>60°C 时 1min 内完全释放酶活。该特性不仅利于
室温建立反应体系,而且允许加入引物后的冻干体系建立。
组分

注意事项:
(1) 长期保存请置于-20°C 以下(24 个月有效);制品反复冻融 10
次不影响性能,但应避免反复冻融;短期推荐置于 2-8°C 保存,在
此条件下制品稳定储存 1 周。
(2) 1xHS Bst4.0 Mix 中,包含 0.25U/µl 的 HotStart Bst4.0 必要时
可单独补充。
(3) 10xGuHCl为500 mM,1x下50mM的GuHCl能显著加速LAMP
扩增约 3~4min。必要时还可以作为样本的裂解液。
(4) 制品中的 LHNB 染料(Leuco-HNB, 隐色 HNB 染料),在反应起
始前与Mg2+结合产生深紫罗兰色,随着 LAMP 反应的进行,产生
的 PPi(无机焦磷酸盐)结合体系中的Mg2+,使得 LHNB 显示出
淡绿色。因此体系对金属离子、EDTA、柠檬酸钠等敏感。
(LHNB-Mg2+复合物) (PPi-Mg2+) + (LHNB)
深紫罗兰色 淡绿色
(5) 本制品在1x浓度情况下,对如下试剂的耐受度,Tris-HCl(pH8.8)
≦10 mM; NaOH≦1 mM; Tween20%≦1%; EDTA(pH8.0) ≦
20 µM; 肝素≦0.5 IU/ml。
(6) LHNB 是还原状态下的染料,任何强氧化剂(H2O2、次氯酸钠
等)均会破坏 L-HNB 的结构,从而直接导致试剂变为深绿色。
(7) 50xLHNB 为紫绿变色染料。如需要红黄变色体系,索取更换为 100xRed Dye。

使用方法
1. 用于常规科研检测和冻干前的研究实验
1.1 25xLAMP Primer Mix 的准备

注意:在常规的测试中(非冻干生产),无需制备 25x 浓度的引物,
10x 浓度的引物足以满足冻干前地研究实验。
1.2 配制 LAMP 反应体系

1.3 扩增反应
反应体系配好后,置于 65°C 反应 20~40min。阳性为淡绿色,阴
性为紫罗兰色。
2. 冻干球的制备

该试剂冻干体系 10 µl,扩增反应体积 25 µl,球直径约 2.2mm。
3. 冻干程序(不同的冻干机有差异,仅供参考)
制球完毕后,-50°C 预冻 5-10min; -50°C 4-8h(真空段);-50°C
升温到 30°C(每小时升温 5°C);30℃ 6-10h。
4. 冻干品的使用
向冻干品中加入 20~22.5 µl 的 ddH2O, 2.5 µl 的 10xGuHCl 后,即
可与液体试剂相同的操作方法进行扩增反应。
特别说明:
(1) 在液体试剂配制完毕后,建议 1h 内完成制球或分装。
(2) GuHCl 具有强腐蚀性,不建议冻干入球,推荐采用 250 mM 或500 mM 的 GuHCl 来裂解、变性样本后,一起加入反应体积(5 µl 或 2.5 µl)。
(3) 防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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