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细菌基因组DNA提取试剂盒
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详细内容
细菌基因组DNA提取试剂盒
B a c t e r i a G e n o m i c D N A P u r i f i c a t i o n K i t
( 离 心 柱 型 )
产品及特点:
本试剂盒适用于从细菌中制备高质量的基因组 DNA。优化的缓冲液体系能迅速裂解
细菌和灭活细胞内核酸酶,然后基因组 DNA 在高盐状态下选择性吸附于硅基质膜上,再
通过快速的漂洗、离心步骤,去除细菌代谢物和蛋白等,低盐的洗脱缓冲液将纯净
基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱下来。使用本试剂盒可从过夜培养的细菌培养液中快速提
取高纯度的基因组 DNA。它具有下列特点:
1. 简便快速:1 小时内可获得高纯度的基因组 DNA;
2. 质量好:可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
产品货号:XY910201
产品规格:50T/430元、100T/770元、200T/1350元
成分规格:
保存条件
蛋白酶 K 于-20℃,其他组分室温(15 - 25℃),可保存 12 个月。 使用方法
自备试剂
溶菌酶(革兰氏阳性菌用)、溶菌酶缓冲液(20 mM Tris,pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;
1.2% Triton X-100)、无水乙醇、RNase A(可选)。
(注意:使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签)
1. 取 0.5 - 3 ml 过夜培养的菌液,室温 10,000 rpm 离心 1 min,弃上清。
(注意:根据菌液的浓度决定取液量,当 OD600=1 时,1ml 菌液浓度为 10
9个细胞,菌液的量不要超
过 10
9个细胞,太多会使离心柱的膜堵塞,提取的基因组 DNA 的量减少,纯度降低)
2. 加入 200 µl Buffer GTL,用枪头充分吹打或用涡旋振荡器充分悬浮。
[注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可略过第 2 步骤,加入溶菌酶进行破壁处理,具体方法为:
加入 180 µl 终浓度为 20 mg/ml 的溶菌酶缓冲液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton
X-100;溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制,否则会导致溶菌酶无活性),37 ℃处理
30 min 以上。如要去除 RNA,可加入浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 4 µl,室温处理 5 min]
3. 加入 20 µl Proteinase K 溶液,充分混匀。
4. 加入 200 µl Buffer GL,充分混匀,56℃水浴 10 min,孵育过程中每隔一段时间颠倒或
震荡离心管使样本分散均匀。溶液变得清亮后短暂离心,以去除管盖内壁的水珠。
(注意:Buffer GL 加入时可能会产生白色沉淀,一般 56℃时会消失,不影响后续实验,如溶液未变
清亮,说明细胞裂解不,可能导致提取的 DNA 量少或者提取的 DNA 不纯)
5. 加入 200 µl 无水乙醇,充分震荡,此时可能会出现絮状沉淀,短暂离心以去除管盖内
壁水珠。
6. 将一个离心吸附柱放入收集管中,将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中,
12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中的滤液。
7. 向吸附柱内加入 500 µl 的 Buffer W1,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中滤液。
(注意:按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
8. 向吸附柱内加入 600 µl Buffer W2,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中废液。
(注意:Buffer W2 为浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
9. 向吸附柱内加入 500 µl Buffer W2,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中废液。
10. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min,甩干残留漂洗液。
(注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用)
11. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管(自备)中,加入 50 - 100 µl Buffer EB,
室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 1 min,离心管底溶液即基因组 DNA。
(注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH
调整其pH值在7.0 - 8.5之间,为了增加回收率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2 min,
再次离心收集)
注意事项
●如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解;
●样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降;
●所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作;
●按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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