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绿色荧光标记大肠埃希氏菌
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详细内容
绿色荧光标记大肠埃希氏菌
英文名称:Escherichia coli-sfgfp green fluorescent
编号:XY9363778
绿色荧光标记大肠埃希氏菌-基本信息
培养基 | 酵母膏:5.0g,蛋白胨:10.0g,NaCl:10.0g,琼脂:15g,pH:7.0(25℃)(培养基灭菌冷却至48℃时,加入Kan抗生素,使其最终含量为100µg/mL) |
生长条件 | 37℃;18-24h;好氧 |
安全等级 | 2 |
形态 | 菌落直径为0.5-1mm,圆形,边缘整齐,不透明,正面灰白色,中间凸起,表面光滑,表面明亮,质地湿润,易挑起,G-(红),杆菌,纯度:纯 |
模式菌株 | no |
操作步骤 | ①准备上述平板 1-2 块;②安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管,充分溶解菌粉后,打入平板中 200µL/个,涂布均匀;④将平板置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。 |
参考用途 | sfgfp又称增强型绿色荧光蛋白,在蓝光激发下可发出绿色荧光,化学性质稳定,对细胞几乎不产生毒性,易于检测。将sfgfp的绿色荧光特征引入大肠埃希氏菌中,作为示踪菌,可以利用其荧光性质对大肠埃希氏菌进行检测。 |
共享方式 | 公益性共享 |
绿色荧光标记大肠埃希氏菌是微生物学研究中常用的技术手段,通过基因工程将绿色荧光蛋白(GFP)及其变体(如 EGFP、sGFP)的编码基因导入细菌,使其稳定表达荧光蛋白,从而实现对细菌的可视化追踪和功能研究。

标记方法与工具
质粒载体转化最常用的方法是通过质粒载体将 GFP 基因导入大肠杆菌。例如,pGFPuv 质粒携带 GFPuv 基因(对紫外线敏感的突变体),在 310 nm 紫外光下可激发绿色荧光。其他常用质粒包括 pUCp18-MCS(携带 GFPmut3 基因,激发波长 501 nm,发射波长 511 nm)和 pCV129(含 EGFP 基因,适用于动物模型)。转化过程通常采用电穿孔法(如 2.1 kV 电压)或化学转化(CaCl₂处理感受态细胞),转化后通过氨苄青霉素或卡那霉素抗性筛选阳性克隆。
基因组整合技术利用 λ Red 重组系统或 CRISPR-Cas9 技术将 GFP 基因整合到大肠杆菌基因组中,可避免质粒丢失问题。例如,通过同源重组将 GFP 基因插入特定位点(如 lacZ 基因),并使用卡那霉素或氯霉素抗性标记筛选。2025 年研究中,CRISPR-AMRtracker 系统通过在耐药基因下游整合 GFP,实现了对耐药基因转移的高效示踪。
新型荧光蛋白与优化
sGFP(增强型 GFP):化学性质稳定,激发波长 395 nm 或 470 nm,适用于蓝光激发,已用于出血性大肠杆菌 O157:H7 的标记。
ifp2.0(氧独立荧光蛋白):在有氧和厌氧环境下均能稳定表达,通过共表达血红素加氧酶或补充发色团(如胆绿素)可进一步优化荧光强度,适用于肠道等复杂环境研究。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
热门标签:绿色荧光标记,Escherichia,coli-sfgfp,green,fluorescent,绿色荧光标记大肠埃希氏菌















