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15min有核红细胞基因组DNA提取试剂盒
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详细内容
15min有核红细胞基因组DNA提取试剂盒
描述:该试剂盒针对有核禽类、鸟类、两栖类、鱼类等有核
红细胞的抗凝全血特性设计(包括:鸡、鸭、鹅、鸽子、鱼
等),采用独特的裂解液,可快速可靠的抗凝全血样本中纯
化出高纯度的 DNA,最大限度的去除蛋白、色素、脂类等
杂质污染。应用本试剂盒获取的 DNA 纯度高,无抑制剂, 产量约 10-20ug。应用本试剂盒
提取的 DNA 可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、
Southern 杂交等多种分子生物学实验。
组分

注意事项与准备工作:
1.1 Washing Buffer 中含有 70%乙醇,使用时远离火源。1.2 gDNA LB1,储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。
1.3 蛋白酶 K(20 mg/ml)长期保存请储存于-20℃(2 年),短期室温保存(1 个月),其它组分储存于室温。
1.4 整套吸附柱的准备: 提前将吸附柱芯放入到 2 ml 吸附柱外套管中,待用。
1.5 gDNA LB1 与 gDNA BB2 溶液有强烈的腐蚀性,使用时务必做好防护,防止灼伤皮肤和眼睛。如有发生,立即用大量的清水冲洗,并就医。
1.6 该试剂盒的保质期为 2 年。
操作方法
2.1 在 1.5 ml EP 管中加入 50 µl 无菌水,并加入 20 µl 的有核抗凝全血,旋涡混合仪上剧烈混匀 10s。
2.2 加入 100 µl gDNA LB1 和 20 µl 蛋白酶 K 漩涡混合均匀 10s,56℃水浴锅中消化 10~30min(长时间消化可提高DNA 的产量)。
2.3 消化完毕后,向溶液中加入 600 µl gDNA BB2,漩涡震荡混合均匀 15s,肉眼观察有无未溶解的血凝块,如果没有血凝块,则直接倒入到整套吸附柱芯中(1.4 步骤中准备)。
注意:如果有未溶解的血凝块,则短离心去除血凝块后,再倒入到吸附柱中,进行后续离心操作。
2.4 将吸附柱放入离心机中,13000rpm 离心 10s,倒掉下层外套管中的过柱液,此时 DNA 已经吸附在柱芯上。
2.5 向吸附柱芯中加入 500 µl Washing Buffer,盖上管盖,并上下混合 2~3 次,进行柱芯洗涤。13000rpm 离心 10s,倒掉下层外套管中的废液。并重复此洗涤步骤一次,倒掉下层外套管中的废液。
2.6 将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心 2min,将残留的乙醇甩干。
2.7 将吸附柱芯从 2 ml 吸附柱外套管中取出,并放入到新的1.5ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 80~100 µl DNA ElutionBuffer,13,000rpm 离心 1min,洗脱液即为基因组 DNA,冷冻保存。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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