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HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase(16U/ul) 无甘油
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详细内容
HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase(16U/ul) 无甘油
描述:Bst 3.2 DNA Polymerase 经酶电子重构架和进化筛
选(in silico Design & invitro Evolution),其为 Bst 3.0 的升
级品,用于 DNA 的 LAMP 扩增。
性能提升包括:
(1)Bst 3.2 包含热启动 Aptamer,该
配体确保酶在<30°C 时,酶活封闭效率>90%,在>60°C 时
1min 内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系,并
大幅降低了低温条件下的非特异扩增;
(2)反应温度提升到
70°C,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高扩增特异性,并
使得粗样品核酸释放更加充分;
(3)包含 Helicaser,因此,
允许在不使用 F3/B3 引物的情况下进行 eLAMP 扩增(easy
LAMP),并允许 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。这将进一步
降低非特异扩增,并使得扩增均一性大幅提升。
注意: HotStart Bst3.2(16U/µl)与 10×IsoAmp Buffer2 均
不含甘油,可用于冻干体系。10xGuHCl 为 500 mM,1x 下
50 mM的 GuHCl 能显著加速 LAMP 扩增约 3~4min,必要时还
可以作为样本的裂解液。
单位定义:一个活力单位即在 65°C 条件下,30 分钟内
催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需
的酶量。
储存:长期保存请置于-20°C 以下(2 年有效);制品反
复冻融 10 次不影响性能,但应避免反复冻融;制品一
经融化推荐置于 2-8°C 保存,在此条件下制品稳定储存
1 个月。

其它说明:
(1) Bst 4.2 & 3.2 Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的推荐反应温度为 70°C。由于 Helicaser 的反应温度为 70°C,因此该酶在 65°C 扩增时,性能会大幅下降。
(2) 制品中包含高浓度的盐组分,使用时做好个人防护,防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入,一旦接触或吸入,请用大量的清水冲洗。
(3)防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。
典型的 LAMP 反应
1. 10xLAMP Primer Mix 的配制
注意:eLAMP(easy LAMP)为去除 F3/B3 引物的方法,为
Bst4.2-3.2 系列专用的使用策略,对于大多数引物组,在 Helicaser
的加持下,扩增速度几乎不受影响。
2. 配制 LAMP 反应体系
注意:关于 Bst 酶的用量,对于绝大多数的 LAMP 扩增来讲,
0.16-0.32U/µl 的浓度,均可获得理想的扩增结果,必要条件下进
行其它调整。
3. 扩增反应: 置于 70°C 反应 20~40min。
使用注意事项:
(1)Mg2+的使用浓度为 4~10 mM 浓度,IsoBuffer 中没有Mg2+,通常情况下,在 6-8 mM Mg2+条件下可获得较好的LAMP 结果。
(2) dNTP 推荐的使用浓度为 1 mM,必要条件下可在 0.5~1.25 mM 间调整。
(3) 使用无模板 DNA 作为对照检测扩增的特异性。
(4) GuHCl 具有强腐蚀性,不建议冻干入球,推荐采用 250mM 或 500 mM 的 GuHCl 来裂解、变性样本后,一起加入反应体积(5µl 或 2.5µl)。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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