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2×RAPA3G Multiplex PCR Mix
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详细内容
2×RAPA3G Multiplex PCR Mix
描述:Multiplex PCR 又称多重 PCR,是指在同一 PCR 反应体系里加上两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR 反应,已被广泛应用于科学研究和疾病诊断等多个领域,特别适用于微量样本的多位点检测。
本制品使用具有极强扩增性能的热启动 RAPA3G DNA聚合酶和优化的多重 PCR 反应缓冲液,使其可有效扩增 20重以上的 PCR,具有极高的灵敏度,上减少了反应体系优化步骤。
特性
RAPA3G DNA 聚合酶,扩增性能强,抗杂质能力极高
完全封闭的热启动特性,50°C 以下 100%无活性
优化的反应缓冲体系,避免非特异性扩增
高灵敏度,有效扩增 0.1ng 的人基因组 DNA(20 重)
组分
储存:长期储存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置于 4°C(3 个月)保存。

使用方法
1. 按下表配制反应体系并混合均匀:

*模板 DNA:人的基因组 100 ng,质粒 100 pg,cDNA 1-5 µl。
2. PCR 扩增循环参数
请注意:该制品为热启动制品预变性步骤 5min 不可缩短,否则 DNA 聚合酶无法恢复活性。
3. 电泳:1kb 以内的扩增产物建议使用 3%~4% 琼脂糖凝胶,电压使用 80V,可以有效的分离各扩增片段。
4. 注意事项:
(1)当模板 GC 含量>70%时,请添加 5×Q-Solution。
(2)推荐引物设计原则:引物长度保持在 22 - 30 bp,扩增产物长度在 2kb 以下,GC 含量 50% - 60%,尽量减少各引物之间 TM 的差值。
(3)检测单引物特异性:多重 PCR 反应前,应对设计的引物逐一扩增,以确定是否有非特异性扩增和扩增效率。
(4)引物推荐使用浓度:推荐扩增片段<300bp 每条引物的反应终浓度为 0.2-0.3 µM,扩增片段>300bp 每条引物的反应终浓度为 0.05-0.15 µM,如某些目标片段产量偏低或偏高,可适度调整其对应引物使用量以优化反应结果。
(5)反应前需将引物制成 10×Primer Mix:
常见问题及解答:
1. 扩增产物少或没有扩增。
(1) 降低退火温度(每个梯度降低 1°C)。
(2) 增加模板量
(3) 增加 PCR 循环数。
(4) 增加退火时间为 90 sec,必要时可延长退火时间至 3min。
(5) 增加引物使用量。
2. 存在非特异性扩增。
(1) 减少循环数,提高退火温度(每个梯度降低 1°C)。
(2) 减少引物使用量。
(3) 重新设计引物。
3. 电泳时条带模糊。
(1) 减少循环数(每次减少 3 个循环)。
(2) 减少起始模板量。
(3) 延长延伸步骤时间至 15 - 30 min。
(4) 减少退火时间。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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