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5xDualStart 3GmTTx DNA/RNA qPCR Mix(可冻干)
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详细内容
5xDualStart 3GmTTx DNA/RNA qPCR Mix(可冻干)
描述:双热启动的 DualStart 3GmTTx qPCR Mix 中包含核 酸适配体封闭的热启动 3GTaq DNA 聚合酶、极度耐热逆转 录酶(Extreme ThermoStable Reverse Transcriptase, ET RTase)、dNTP、Mg2+激活剂(Activator)、Mg2+与其它稳定 剂。该制品仅在Mg2+条件下(无需 Mn2+),即可对于 DNA 和 RNA 进行无偏差扩增。其为 TaqMan PCR 的专用预混 试剂,可以高灵敏的检测 DNA 和 RNA 分子。得益于耐受 95℃高温的 ET RTase,无论是 DNA 或 RNA 病毒,均可 通过加热反应来释放样本中的核酸分子,并用于后续 PCR 扩增。因此,粗制样本该试剂可以直接进行检测,无需核 酸纯化。
试剂特性:
(1)3GTaq 酶和 ET RTase 均为核酸适配体
(Aptamer)封闭的热启动酶(30°C 以下活性封闭>90%),
在 50°C 以上完全恢复活性。除此外,如实验有更高的热启
动要求,可额外使用单独的组分(Blocker)对反应体系的Mg2+进行封闭。Blocker 与Mg2+形成不溶沉淀物,聚合酶
活性被完全阻断,在 95℃加热 2min 后,Activator 水解掉
Blocker,Mg2+得以释放,从而启动扩增反应,从而实现双重
热启动功能。
(2)ET RTase 在 95°C 加热 15min 后仍然保
留全部活性,该酶通过修改 TTx 酶配体中心,使其逆转录
活性,由 Mn2+依赖变为Mg2+这种变化使得 RT-PCR 得
以同步化。
(3)以 RNA 为模板进行 RT-PCR 扩增的最大
长度为 500bp,扩增效率最高的长度为 70-150bp。
(4)
5x3GmTTx Mix 不含甘油,在配合 研制的 Q10
球型冻干赋形剂后,可轻松制备含扩增引物的
冻干球。这种组合设计便于研究、开发、生产流程于一体
化操作,并兼具一定的灵活性,减少了试剂开发和固定化
生产的难度。
组分
注意:(1)5xDualStart 3GmTTx Mix 溶化时可能会有白色结晶,
必要时可于 37℃下放置 2-5min 使结晶体溶解。
(2)Blocker25 为可选试剂,在不使用该试剂时,扩增体系仍然
由 Aptamer 来维持热启动效应。
(3)在使用 Blocker25 时,其应优先(或同时)于引物加入到 Mix
中。因此建议,引物探针预先与 Blocker 混合后使用。
(4)冻干球制备过程中,试剂配制后应 15min 内完成制球。
(5)避光保存:-20°C 可保存 3 年。

操作方法
1. 按照如下组分配制 20 µl PCR 反应体系

注意:由于 Blocker 与Mg2+形成不溶物后,会迅速沉淀,因
此配制工作液后,应尽快分装到反应管中。如检测样本较多
时,分装期间可再次旋涡 5s 后再分装
2. DNA 的 qPCR 反应程序:
3. RNA 的 qPCR 反应程序:
4. 冻干球的制备
该试剂冻干体系 10 µl,扩增反应体积 25 µl,球直径约 2.6mm。
5. 冻干程序(不同的冻干机有差异,仅供参考)
制球完毕后,-50°C 预冻 5min;-50°C 2~4h(真空段);-50°C
升温到 30°C(每小时升温 5°C);30°C 6-10h。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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