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G5U HiFi DNA Polymerase
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详细内容
G5U HiFi DNA Polymerase
描述:G5U High-Fidelity DNA Polymerase,融合 Q5 和 Q5U 的
性能于一体,使其成为一酶多用的全能选手。该酶来源于高保真
DNA 聚合酶,并加入了增强的延伸结构,使其具有超保真性能(与
Q5 同水平)、长片段扩增能力、高产量、dUTP 渗入能力、扩增含
有尿嘧啶模板的能力。使用该酶可轻松扩增 8kb 的基因组 DNA、
20kb 的 λDNA。该酶具有 2kb/min 的延伸速度,强 3’-5’的外切酶
活性(280xTaq 酶保真度),产物为平末端。
许多有高保真功能的聚合酶为 B 型 DNA 聚合酶,在遇到
DNA 模板中的尿嘧啶碱基时停止复制。 G5U 删除了尿嘧啶结合
域,使其能够读取和扩增含有尿嘧啶的模板,该性能赋予其独特的
“U” 特征。其有两个重要的应用方向:(1)用于超保真扩增重亚硫
酸氢盐转化、脱氨基、或受损 DNA;(2)在超保真扩增中搭配 dUTP
和热敏 UDG,用于防止 PCR 体系中携带污染。除此外,也多用
于 USER 克隆。
组分
(1)活性定义:一个活力单位指 74° C 条件下,30min 催化 10 nmoldNTP 的掺入反应,成为酸不溶性物质所需的酶量。
(2)PCR 反应性能:以 λDNA 为模板,扩增 20kb DNA 片段;以人类基因组 DNA 为模板,扩增 8kb DNA 片段。
(3)酶存储液:10 mM Tris-HCl,pH8.0, 150 mM NaCl, 2 mM DTT,50%Glycerol。1xG5U Buffer 中含 1.5 mM Mg2+,必要时可自行调整补充。
(4)储存:-20°C 可保存 3 年。

使用方法
1. 按以下组分配制 PCR 反应液
2. 推荐的“万能 PCR 扩增参数”
特殊说明:(1)该“万能 PCR 扩增参数”在实际应用中,引物 TM
值(50⁻⁷0℃)范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为
28(5+23),如产物扩增亮度不足,则增加循环 2 的次数到 25-28
个,通常不宜超过 28。(2)如果仍然不能获得良好的扩增结果,
则可以改变,循环 2 中的退火温度为 50-65°C(上表中为 55°C)。
使用注意事项(必读)
(1) 引物、模板、酶浓度使用参考表
(2) 在进行防污染扩增时,dNTP 中的 dTTP 可用 dUTP 来代替,
dUTP 占比 75-100%。该酶可以用 dUTP 完全取代 dTTP,扩增效
率有所下降,但通常不影响下游应用(建议扩增片段<1kb)。在防污
染扩增时,通常需要搭配热敏 UDG(货号:C5029)来实现污染
物的去除,热敏 UDG 的使用浓度通常为(0.01-0.05U/µL)。
(3) 扩增片段 GC 含量>65%时,推荐添加 5xQ Solution(货号:
A3002)至 1x 浓度,来提升高 GC 含量的扩增性能。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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