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5min病毒DNA/RNA双提试剂盒
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详细内容
5min病毒DNA/RNA双提试剂盒
描述:该试剂盒可以快速可靠的从血清、血浆、拭子、尿液、
痰液、动物组织、培养细胞中快速提取病毒及宿主的 DNA
和 RNA,整个用时在 5min 内完成。提取效率高(最高可获
得 20µg 以上的总产量)。应用本试剂盒提取的 DNA、RNA
可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern
杂交等多种分子生物学实验。
组分
注意事项与准备工作:
1.1 自备试剂:异丙醇
1.2 Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。
1.3 gDNA BP22 与 gDNA CP32 溶液有强烈的腐蚀性,使用时务必做好防护,防止灼伤皮肤和眼睛。如有发生,立即用大量的清水冲洗,并就医。
1.4 整套吸附柱的准备: 提前将吸附柱芯放入到 2 ml 吸附柱外套管中,待用。
1.5 室温避光保存,有效期为 2 年。
样本的预处理:
为标准化操作步骤的建立,推荐将组织、细胞等样本做成液体悬液进行后续操作。
2.1 液体类型的样本(包括:血清、血浆、细胞上清液、拭子液、尿液、痰液、灌洗液)可以直接取 150 µl 用于提取。
2.2 动物组织:将组织放入 ddH2O或 PBS 中进行研磨,使组织的浓度在 20-100 mg/ml。 取 150 µl 组织悬液(或离心后的病毒上清液)用于后续提取。
2.3 感染的培养细胞样本:将104⁻⁷个感染细胞重悬于 150µl 的 ddH2O中用于后续提取。

提取操作方法
3.1 在 1.5 ml EP 管中加入 300 µl 的 gDNA BP22 溶液,并加入 150 µl 的液体悬液样本(样品不足 150 µl 时,用 ddH2O补足)。 用旋涡混合仪,剧烈旋涡混合 10s。
3.2 打开管盖,向溶液中加入 150 µl 的 gDNA CP32 溶液,用旋涡混合仪,剧烈旋涡混合 10s。
3.3 将 1.5 ml EP 管放入离心机,13000rpm 离心 1~2min。
此时,样本中的蛋白会紧密的贴合沉淀在 EP 管底部。将上清液(约 500 µl)直接倒入到整套吸附柱芯中(1.4 步骤中准备)。
注意:勿将蛋白沉淀倒入,并保持吸附柱管盖处于打开状态。
3.4 向吸附柱芯的溶液中,加入 250 µl 的异丙醇(此时总体积约 750 µl),盖上吸附柱管盖,上下混合 2-3 次。
注意:此步骤务必将异丙醇与上清液混合均匀后,再进行后续离心,否则会导致提取效率下降。
3.5 将吸附柱放入离心机中,13000rpm 离心 10s,倒掉下层外套管中的过柱液,此时核酸已经吸附在柱芯上。
3.6 向吸附柱芯中加入 500 µl Washing Buffer,盖上管盖,并上下混合 2~3 次,进行柱芯洗涤。13000rpm 离心 10s,倒掉下层外套管中的废液。并重复此洗涤步骤一次,倒掉下层外套管中的废液。
3.7 将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心 2min,将残留的乙醇甩干。
3.8 将吸附柱芯从 2 ml 吸附柱外套管中取出,放入到新的1.5 ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 50~60 µl DNA ElutionBuffer,13,000rpm 离心 30s,洗脱液即为 DNA 和 RNA,冷冻保存。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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