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pMT/V5-His-TOPO
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详细内容
pMT/V5-His-TOPO
中文名称:pMT/V5-His-TOPO
产品规格:2ug
产品货号:XY92823VT
运输:常温
保存:-20°C
有效期:两年
货期:一周
其他:多克隆位点经测序验证

基本结构
启动子:含有金属硫蛋白(mmbedllothionein,MT)启动子,可被铜离子、镉离子等重金属离子诱导,从而启动下游基因的表达。在没有诱导物存在时,启动子活性较低,目的基因表达量低;加入诱导物后,启动子被激活,能够驱动目的基因大量表达。
多克隆位点:位于启动子下游,包含多个限制性内切酶酶切位点,方便目的基因的插入,不同的 pMT/V5-His-TOPO 载体可能具有不同的多克隆位点组合,如 EcoRI、XhoI 等,可根据实验需求选择合适的酶切位点进行基因克隆。
V5 和 His 标签:载体上带有 V5 和 His 标签序列,位于目的基因的 C 末端。V5 标签是来自于猿猴病毒 5(SV5)的一段多肽,可用于蛋白的检测和纯化;His 标签由 6 个组氨酸残基组成,能与镍离子等金属离子特异性结合,利用镍柱亲和层析可以方便地对表达的融合蛋白进行纯化。
复制原点:保证载体在宿主细胞(如大肠杆菌和果蝇细胞)中能够自主复制,维持载体的稳定存在,通常具有高拷贝数的复制原点,可使载体在细胞中大量扩增,从而提高目的基因的表达量。
筛选标记:一般携带氨苄青霉素抗性基因,用于在大肠杆菌中筛选含有载体的阳性克隆。在含有氨苄青霉素的培养基上,只有成功转化了载体的大肠杆菌才能生长。
特点
诱导表达:通过重金属离子诱导 MT 启动子,可实现目的基因的可控表达,能够根据实验需求在特定时间和条件下启动基因表达,避免目的基因持续表达对细胞造成的潜在毒性或不利影响,有利于研究基因的功能和蛋白的表达调控。
融合标签:V5 和 His 双标签的设计,为蛋白的检测、纯化和定位提供了便利。利用抗 V5 抗体可以通过免疫印迹、免疫荧光等方法检测目的蛋白的表达和定位;His 标签则可用于快速纯化目的蛋白,获得高纯度的蛋白产物,便于后续的结构和功能研究。
广泛的应用范围:适用于多种果蝇细胞系,如 S2 细胞等,可用于在果蝇细胞中表达外源基因、研究基因功能、蛋白相互作用、信号通路调控等生物学过程,也可用于生产重组蛋白、疫苗等生物制品。
TOPO 克隆技术:pMT/V5-His-TOPO 载体利用 TOPO 克隆技术,能够快速高效地将 PCR 产物克隆到载体中。TOPO 酶能够特异性地识别并切割 DNA 片段的末端,与 PCR 产物的末端连接,无需传统的限制性内切酶酶切和连接反应,大大简化了克隆流程,提高了克隆效率,且具有较高的准确性和特异性。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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