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pTWIN1载体
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详细内容
pTWIN1载体
产品规格:2ug
产品货号:XY93831VT
基本信息
| 质粒类型: | 大肠杆菌表达载体 |
|---|---|
| 克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
| 载体大小: | 7375bp (查看载体序列) |
| 载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
质粒图谱

类型:大肠杆菌表达载体,主要用于在大肠杆菌中进行重组蛋白的表达、纯化以及特定蛋白的分离。
大小:双链 DNA 长度为 7375 碱基对。
抗性:具有氨苄青霉素抗性,可在含有氨苄青霉素的培养基中筛选出成功导入该载体的大肠杆菌。
结构特点
复制起点:包含来自 pBR322 的 pMB1 复制起点,可使载体在大肠杆菌中维持一定的拷贝数,同时还含有噬菌体 M13 的复制起点,便于通过辅助噬菌体超感染产生单链 DNA。
启动子:融合基因的表达受 T7 启动子控制,且因 lacI 基因的存在而受 IPTG 诱导调控,只有在加入 IPTG 时,T7 启动子才能启动目的基因的转录,从而实现对蛋白表达的控制。
多克隆位点:位于修饰的 Ssp DnaB 和 Mxe GyrA inteins 之间,便于目标基因以框内融合的方式插入,保证表达出正确的融合蛋白。
内含肽:含有两种修饰的内含肽,即 Ssp DnaB 和 Mxe GyrA。Ssp DnaB 内含肽的 C 端与目标蛋白之间肽键的水解可通过在室温下改变 pH 值触发,而 Mxe GyrA 内含肽的自裂解活性则可通过添加含巯基的化学物质来诱导。
亲和标签:具有来自环状芽孢杆菌的几丁质结合域(CBD),融合在每个内含肽上,可利用与 CBD 高亲和力的几丁质树脂的层析柱对表达的融合蛋白进行亲和纯化。
工作原理
蛋白表达:将目标基因插入到 pTWIN1 载体的多克隆位点后,转化到含有 T7 RNA 聚合酶基因的大肠杆菌宿主细胞中,在 IPTG 的诱导下,T7 启动子启动转录,核糖体结合到 mRNA 上进行翻译,表达出包含目标蛋白、内含肽和几丁质结合域的融合蛋白。
蛋白纯化:利用几丁质结合域与几丁质树脂的特异性结合,通过亲和层析将融合蛋白吸附到层析柱上,然后通过改变条件,如添加巯基试剂或改变 pH 值,诱导内含肽的裂解,使目标蛋白从融合蛋白中释放出来,从而实现目标蛋白的纯化。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
热门标签:pTWIN1载体,pTWIN1质粒,pTWIN1















