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pFastBac1载体
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详细内容
pFastBac1载体
产品规格:2ug
产品货号:XY91571VTav
基本信息
| 质粒类型: | 昆虫细胞表达载体 |
|---|---|
| 启动子: | Polyhedrin |
| 表达水平: | 高 |
| 克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
| 载体大小: | 4776 bp (查看载体序列) |
| 5' 测序引物: | pFastbac-F: TATTCCGGATTATTCATACC |
| 3' 测序引物: | pFastBac-R: ACAAATGTGGTATGGCTGA |
| 载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
| 筛选标记: | Gentamicin (庆大霉素) |
质粒图谱

结构特点
启动子:具有多角体蛋白(polyhedrin)启动子,这是杆状病毒特异性启动子,能驱动目的基因在昆虫细胞中高效表达。
多克隆位点(MCS):含有多个限制性内切酶识别位点,便于目的基因的插入和克隆。
转座子元件:包含 Tn7 转座子元件,可用于将目的基因转座到杆状病毒穿梭载体(bacmid)上。
其他元件:还含有 SV40 poly(A)信号,用于 mRNA 的正确加工和终止;f1 ori 可用于单链 DNA 的产生;AmpR promoter 和 AmpR 为氨苄青霉素抗性基因及启动子,用于在大肠杆菌中筛选含有该载体的菌株;GmR 为庆大霉素抗性基因,用于在昆虫细胞中筛选稳定转染的细胞。
表达系统:pFastBac1 载体主要应用于 Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统。该系统包括 pFastBac1 载体和含杆状病毒穿梭载体 bacmid(bMON14272,136kb)及辅助质粒的大肠杆菌 DH10Bac 宿主菌株。将插入目的基因的 pFastBac1 重组质粒转化 DH10Bac 菌株,pFastBac1 重组质粒中的 mini-Tn7 元件和 bacmid 上的 mini-attTN7 会发生转座,形成重组的 bacmid。通过蓝白斑筛选和 PCR 等方法鉴定重组克隆后,提取重组的 bacmid 转染昆虫细胞,可产生重组杆状病毒,并表达目的蛋白。
应用领域
蛋白表达与生产:用于在昆虫细胞中高效表达各种重组蛋白,包括药用蛋白、疫苗抗原、酶等。
蛋白结构与功能研究:表达的重组蛋白可用于研究蛋白的结构、功能、相互作用等,为生物学基础研究提供重要工具。
基因功能研究:通过在昆虫细胞中表达特定基因,观察其对细胞生理过程的影响,从而研究基因的功能。
使用注意事项
目的基因克隆:插入的目的基因必须包含起始密码子和终止密码子,以保证蛋白的正确起始翻译和终止翻译。
大肠杆菌转化:转化 DH10Bac 菌株时,要注意感受态细胞的质量和转化条件,以提高转化效率。
筛选与鉴定:蓝白斑筛选时,要准确挑选白色菌落,并通过 PCR 等方法进一步鉴定重组克隆,确保获得正确的重组 bacmid。
昆虫细胞培养与转染:选择合适的昆虫细胞系(如 Sf9、Sf21 等),并优化细胞培养条件和转染方法,以提高重组杆状病毒的产生和目的蛋白的表达水平。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
热门标签:pFastBac1载体,pFastBac1质粒,pFastBac1















