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嘌呤霉素溶液(Puromycin,1mg/ml)
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详细内容
嘌呤霉素溶液(Puromycin,1mg/ml)
产品货号:XY9-43423
产品规格及价格:10ML/2800元
产品简介:
嘌呤霉素溶液是一种在细胞生物学研究中常用的选择性抗生素试剂。
核心作用与原理
主要用途:用于筛选和维持成功转入了含嘌呤霉素抗性基因(如 pac 或 puro)的细胞株。
作用机制:嘌呤霉素是一种氨基核苷类抗生素,它会模拟氨酰 - tRNA 的结构,进入核糖体的 A 位点,导致肽链合成提前终止,从而杀死正在进行蛋白质合成的细胞。
筛选原理:抗性基因能编码一种嘌呤霉素 N - 乙酰转移酶(PAT),该酶能将嘌呤霉素乙酰化,使其失去活性。因此,只有成功整合了抗性基因的细胞才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活和增殖。

可执行方案:如何使用
准备工作液
确定工作浓度:这是最关键的一步。建议设置一个浓度梯度(如 0, 0.5, 1, 2, 5, 10 µg/mL)的预实验,处理未转染的细胞,观察 3-5 天,找到能在 3-5 天内完全杀死所有细胞的最低浓度,即为最佳工作浓度。
配制:将 10 mg/mL 的储存液用预热的、无菌的细胞培养基稀释至所需的工作浓度。例如,要得到 2 µg/mL 的工作液,需将 1 µL 储存液加入到 4999 µL 培养基中。
转染后筛选
在细胞转染后(如质粒转染或病毒感染后 24-48 小时),弃去旧培养基。
加入含有预设好浓度的嘌呤霉素工作液。
每隔 2-3 天更换一次新鲜的筛选培养基。
持续筛选 7-14 天,直到出现稳定生长的细胞克隆。
单克隆化与扩大培养
挑取形态良好的单克隆细胞团,转移至新的培养孔中。
在含有维持浓度(通常为筛选浓度的 1/2)的嘌呤霉素培养基中进行扩大培养。
后续维持培养可长期使用维持浓度,或在确认细胞株稳定后移除抗生素(但有丢失抗性的风险)。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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