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MaxEndoFree无内毒素质粒大提试剂盒
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详细内容
MaxEndoFree无内毒素质粒大提试剂盒
E n d o F r e e M a x i P l a s m i d P u r i f i c a t i o n K i t
( 离心柱型 )
产品及特点:
本试剂盒适用于无内毒素高纯度质粒 DNA 的大量制备与纯化,柱上去除内毒素,操
作简单。菌体经改良的碱裂解处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱
硅胶膜吸附。通过去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质,得到高纯度的无
内毒素质粒 DNA,所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、细胞转染等分子生物
学实验。它具有下列特点:
1. 快捷、高效:操作简便,得率高,节约时间;
2. 纯度高:沉淀致密,去杂干净;
3. 内毒素去除简单:柱上去除内毒素,方便快速,清除干净。
产品货号:XY910109
产品规格:2T/450元、10T/1030元、25T/2050元
成分规格:
(注意:使用前将全部 RNase A 溶液加到 Buffer S1 中混合均匀,2 - 8℃保存;按要求在 Buffer
W2 中加入无水乙醇)
保存条件
室温(15 - 25℃)干燥条件下,可保存 12 个月;更长时间的保存可置于 2 - 8℃。单独
包装的 RNase A 在室温可稳定保存 12 个月。加入 RNase A 后的 Buffer S1 应置于 2 - 8℃
保存,可稳定保存 6 个月。
使用方法
柱平衡:向吸附柱中(吸附柱放入收集管中)加入 2.5 ml 的平衡液 BL,10,000 rpm 离心 2 min,弃
收集管中滤液,将吸附柱重新放回收集管中。(请使用当天处理过的柱子)
1. 取 100 - 200 ml 过夜培养的菌液,室温 10,000 rpm 离心 2 min,弃上清。
2. 加入 10 ml Buffer S1,旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀。
(注意:菌体沉淀一定要悬浮均匀,如有未悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯
度降低)
3. 加入 10 ml Buffer S2,温和颠倒混匀使菌体完全裂解,直到溶液变成清亮、粘稠。
(注意:不可剧烈震荡,以免造成基因组 DNA 片段的污染,所用时间不要超过 5 min,以免质粒受
到破坏)
4. 加入 10 ml Buffer S4,立即颠倒混匀,可见白色的絮状物产生,然后 10,000 rpm 离心
10 -30 min。小心将上清液转移到一干净的 50ml 离心管中,加入 0.3 倍异丙醇混匀。
(注意:Buffer S4 加入后应立即混合,避免产生局部沉淀)
5. 小心将上清液转移到离心吸附柱中,10,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中的滤液。
(注意:吸附柱的最大容积 15 ml,要分多次转入)
6. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer,室温静置 5 min,10,000 rpm 离心 1 min,弃
收集管中滤液。
7. 加入 10 ml Buffer W2,室温 10,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中滤液。
(注意:Buffer W2 为浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防酒精挥发)
8. 加入 5 ml Buffer W2,室温 10,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中滤液。
9. 室温 10,000 rpm 离心 5 min,甩干残留液体。
10. 将离心吸附柱置于一个新的 50 ml 塑料离心管中,打开管盖,放置 5 min,使乙醇彻
底挥发干净。
11. 加入 1 - 2 ml 洗脱液 Buffer EB,室温放置 2 min,10,000 rpm 离心 2 min,离心管底
溶液即质粒 DNA。
(注意:为增加洗脱效率,可将得到的质粒溶液重新加入到吸附柱中重复步骤 11 一次,如需使用去
离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间)
注意事项
●细菌培养时间一般为 12-16 小时,如接种量大则应减少培养时间,过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒 DNA 突变;
●每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S4 是否形成沉淀,如有沉淀 37℃溶解后再用;
●质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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