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细胞周期检测试剂盒(PI)
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详细内容
细胞周期检测试剂盒(PI)
产品货号:XY9-4104
产品规格及价格:20T/400元;50T/750元;100T/1050元
产品简介:
细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性,细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。
细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期:细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S期:DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时,细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期。因此,单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,这两个细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
PI为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
产品应用:
流式细胞仪
使用方法:
1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2.使用含 EDTA 的细胞消化液。
3.洗涤细胞离心转速不可超过 800×g。
4.乙醇固定时离心大概采用 2000×g 力 5 分钟,离心力太小可能部分细胞难以沉淀。
5.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞,并缓慢滴加 75%乙醇,直接加入会导致细胞团聚的现象,很难重悬成单细胞。或者先用冷 PBS 悬浮细胞,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇,终浓度为70-90%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
1. 收集样本细胞,细胞数量在 5-10X106 个。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次。
3. 在 15ml 离心管中,用 500 µl PBS 重悬细胞。
4. 滴加 2-5ml 冷乙醇 4℃固定过夜或-20℃固定 1 小时。
5. 取 5X106 细胞,在 15ml 锥形离心管中 1000×g 离心 10 分钟,弃上清,收集细胞。
6. 用冷 PBS 洗涤细胞两次。
7. 用 500 µl 冷 PBS 重悬细胞。
8. 加入 Rnase A 溶液 20 µl, 37℃水浴 30 分钟。
9. 用 400 目细胞筛网过滤。
10. 在 1000×g 离心 10 分钟,弃上清,收集细胞。
11. 加入 400 µl PI 染液重悬细胞,轻轻混匀后 4℃避光孵育 30 分钟-1 小时。
12. 流式检测结果。激发波长为 488nm。采用适当分析软件进行细胞 DNA 含量分析和光散射分析。
常见问题分析:
1.染色后找不到细胞?
固定细胞可能难以离心沉淀;固定细胞可能成团;固定细胞膜容易损伤成碎片。操作过程中注意以上几点。
2.可以不固定细胞吗?
本试剂盒可以用于非固定细胞的周期检测。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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