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Elisa常见样本的处理方法

点击次数：3557 发布时间：2017/4/20 18:37:16

Elisa常见样本的处理方法

Elisa 是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法，样本的处理对于 Elisa 实验的成功有着举足轻重的作用。样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到 Elisa 实验的结果。上节我们介绍了血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等常见样本的处理方法，这一节我们将会介绍皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等特殊样本的处理方法，供研究者参考。

1、痰液

1）选择痰液中较为粘稠部分称重，加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇)， DTT 的主要作用是溶解粘液，用吸管反复吹打，漩涡器振荡 15s，37 度恒温水浴振荡 5 分钟；

2）加入两倍于痰量的 PBS 缓冲液继续振荡 15-20 分钟，150 目的金属丝网过滤，1500 rpm 离心 10 分钟吸取上清液检测。

2、粪便

尽量采集干的粪便，粪便过稀会较难处理且降低检测的准确性。采集的重量应大于 50 mg，将粪便用 PBS 洗 3 次（最终粪便质量：PBS 体积=1:9），用超声粉碎（或捣碎）后于 5000×g 离心 10 分钟，取上清检测。

3、唾液

将样品收集于离心管后在-70 度冰冻 1 小时。在冰上融化样品后，2000×g 离心 10 分钟，取上清检测。

4、精浆

将精液收集于无菌容器中，正常精液射出体外呈稠厚的胶冻状，射出体外后需在室温或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纤维蛋白溶解酶的作用下液化，变的稀薄。待精液完全液化后，将精液 4000 rpm 离心 10 分钟分离精浆进行检测。

5、皮肤组织

用匀浆机加冰的 PBS 研磨 20-50 mg 的皮肤组织使其充分溶解，离心 20 分钟，10000 g/分钟，取上清检测。

6、牛乳

于 4 度，12000g／分钟离心 30 分钟，去除上层脂肪，以及下层沉淀，取中间层样本用于检测。

7、脑脊液、肺泡灌洗液

样本收集后于 1000×g 离心 20 分钟，离心后收集上清，并将标本保存于-20 度，且应避免反复冻融。

处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月， -80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。样本的处理是实验成功的第一步，以上就是关于 Elisa 特殊样本处理方法的简述，供研究者参考。

Elisa常见样本的处理方法（二）

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