产品名称：HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS,7.05)

产品规格：100mL

产品保存：-20℃，有效期 1 年

产品组成：

产品介绍：

外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等，2×HEPES缓冲盐溶液主要用于磷酸钙转染，其主要成分为HEPES，HEPES是一种非离子两性缓冲剂，能有效控制pH值在6.8~8.2范围，尤其在 pH7.2～7.4具有较好的缓冲能力，终浓度一般为10～50mmol/L，培养液内含20mmol/LHEPES即可达到较好的缓冲能力。

HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS)是一种常用的细胞转染溶液，主要由HEPES、氯化钠、磷酸盐等组成，其适pH值为7.05~7.12，经过滤除菌处理；影响磷酸钙转染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA在细胞上停留的时间、休克时间；2×HeBS要求DNA浓度在10～ 50µg 为宜，Hela、BALB等细胞沉淀放置16h，CHO、DUKX、BI等细胞可以通过甘油、DMSO进行热休克处理以提高转染效率。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤：（仅供参考）

1、在转染前24h用蛋白酶消化培养细胞，取适量数期细胞转移至新的培养器皿中，使细胞在转染时生长状态良好。

2、在加入DNA之前2~4h，按9ml/10cm培养皿的比例加入完-全培养液，置于37°C 5%CO₂，培养箱培养。

3、取适量乙醇沉淀的DNA溶解于450µl无菌水中，加入50µl 2.5MCaCl₂，并充分混匀，使Ca²⁺终浓度达到0.25M。

4、用移液器一边吹打2×HeBS，一边逐滴加入配制好的DNA/CaCl₂溶液(操作应迅速，一般在30~60s)，并剧烈振荡5s，室温下静置20~30min以形成沉淀。

5、取沉淀均匀加入到培养皿细胞中，轻轻晃动使沉淀于培养液充分混匀，置于37C 5%CO₂培养箱培养4~16h；如果培养细胞为CHO、DUKX等，可以DMSO或甘油进行休克处理，转染效率会增加，即培养4~6h后用2ml含10%甘油或20%DMSO的完-全培养液替换当前培养液，室温下静置3min，加5ml PBS摇动混匀。

6、去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入5~10ml完-全培养液继续培养。

7、对于瞬时转染，在转染的不同时间点内收集细胞并检测，一般时间多控制在12~60h以内。

8、对于稳定转染，转染后在非选择性培养液培养18~48h，一般时间多控制在24~36h，以便外源基因表达。

9、用胰-蛋白酶消化细胞并传代，更换适当的选择培养液继续培养，每2~4d更换一次选择培养液，一般10～14d会出现目的细胞克隆。

自备材料：1、胰-蛋白酶消化液、PBS、无菌水、CaCl₂溶液、甘油或DMSO、筛选药物

注意事项：

1、注意无菌操作，尽量避免污染。

2、对于瞬时转染，可以不用乙醇沉淀的DNA。

3、本品易被细菌污染，可分装后-20℃保存，可延长保质期。

4、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

5、休克处理某些细胞系会使转染效率提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。

6、转染12~24h后，可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。

7、该试剂用于转染时应检测其转染效率，好的转染效率应介于30~60%之间。

8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。